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随着近代科学技术的进步,越来越多的昆虫病毒被鉴定出来,昆虫病毒的性质也逐渐被人们了解。本文利用电镜观察了茶刺蛾核型多角体病毒Iragoides fasciata SingleNucleopolyhedrovirus(IrfaNPV)和灰斑古毒蛾核型多角体病毒 Orgyia ericae SingleNucleopolyhedrovirus(OrerNPV)超微形态。利用建库和PCR方法定位和克隆了两种病毒的多角体蛋白基因(polyhedrin,ph),分析了IrfaNPV EcoR I/Xho I 11.626 kb大片段13个ORF以及EcoR I 4.2/1.6kb片段2个ORF部分序列的分子特性,确定了以上两个病毒与其它杆状病毒的亲缘关系;酶切分析了OrerNPV基因组,生物测定了OrerNPV毒力。同时探讨了IrfaNPV与非宿主的TN-5B1-4细胞间的侵染关系,检测了IrfaNPV在非宿主的TN-581-4细胞中的复制。对与AcMNPV ORF38、AcMNPV ORF150同源的If-Ac38、If-Ac150两个基因进行原核表达与多克隆抗体制备,分析了Ac38与Ac150在TN-5B1-4细胞中的表达时相。主要研究结果包括下列四个部分: 1.IrfaNPV形态特征和基因组部分序列分析 我们从茶刺蛾Iragoides fasciata幼虫分离得到核型多角体病毒,病毒粒子的横切面特征显示该病毒为单粒包埋型;以核型多角体病毒ph基因兼并引物,将IrfaNPV的ph基因定位在IrfaNPV基因组11.6kb EcoR I/Xho I酶切片段上,并测通了该片段,其GC含量为31.73%。同源性分析表明IrfaNPV ph与其它已知序列的58种杆状病毒的ph同源性都很高,与AcMNPV和BmNPV的氨基酸同源性分别为96%和95%。经过序列分析发现该片段还包含13个ORF开放阅读框,在pk-1和If-Ac150之间存在一个同源重复序列(homologous repeat,hr)。 对EcoR I 4.2/1.6kb片段的两端序列测定表明,两个片段分别含有Ac47同源基因If-Ac47和编码杆状病毒结构蛋白VP80的ORF。If-Ac47多肽与AcMNPV的ORF47和BmNPV的ORF38有42%的同源性,与RaouMNPV的ORF44有40%的同源性:对lef2、lef11、odv-e56、ORF1629、pk-1、ptp和VP80/P87基因的分子进化均显示IrfaNPV与AcMNPV、RaouNPV和BmNPV的同源性最高,属于group Ⅰ家族。结果表明从茶刺蛾分离出的核型多角体病毒是一种与AcMNPV有较近亲缘关系的新的NPV病毒。 2.If-Ac38、If-Ac150的原核表达,抗体制备及Ac150和Ac38基因表达检测 将IrfaNPV两个基因If-Ac150和If-Ac38分别在大肠杆菌表达系统pGEX-4T-2/BL21和pET-28-a/BL21中的表达进行了研究。两个基因在pGEX-4T-2/BL21和pET-28-a/BL21系统中