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背景与目的:现在的许多研究表明肿瘤的演变过程与分子学上表现出的异常情况密切相关,通过观察肿瘤mRNA的表达谱,发现观察某些特定mRNA的表达情况对肿瘤的诊断有一定的临床意义。结肠癌的死亡率位于我国恶性肿瘤死亡率女性第二位、男性第四位的,目前尚无基因水平的诊断标志。现今的大量研究认为,结肠癌的发生与人体免疫有着极其密切的关系。本研究旨在分析我国结肠癌(Colorectal Cancer, CRC)患者不同部位正常结肠及直肠黏膜中mRNA表达变化情况,探讨通过mRNA芯片表达谱技术,检测相关mRNA的表达情况,从中筛选出与免疫功能有关的mRNA,研究结肠癌患者有关免疫功能的mRNA表达的变化情况,试分析其表达情况与结肠癌发生的关系,试分析其对临床结肠癌早期诊断与治疗的意义。材料与方法:结肠癌患者18例,均已经由病理证实。取肿瘤肛门侧5cm、结肠及直肠正常黏膜共46个部位的标本(在实验过程中将以上3个部位定义为a、b、c),将取出后的标本放于mRNA保护剂中浸泡后,放于-80度冰箱中保存。然后应用RNeasy mini kit提取上述标本中的mRNA,应用NanoDrop ND-1000全波长紫外/可见光扫描分光光度计及Agilent RNA 6000 Nano Kit检查mRNA的浓度与质量,挑选检测合格的mRNA。将挑选出的mRNA应用cy3染色,将染色合格的mRNA入组。然后应用Whole Human Genome (4x44k)Oligo Microarray Kit进行杂交,杂交后将芯片放入Agilent芯片扫描仪中进行扫描,经过Quality Ccontrol系统检测后将检测合格芯片的扫描结果应用GeneSpring GX 11.0.2图像分析系统进行图像分析。结果:对所取样品应用RNeasy mini kit提取mRNA并应用NanoDrop ND-1000检测发现mRNA总量在50ng以上者有3例患者共9份标本,应用Agilent RNA 6000 Nano Kit对以上标本进行检测,所有标本mRNA片段完整度评分均在5分以上(证明所提取样品的mRNA完整性良好且没有降解,纯度较高可以用于基因芯片检测),应用Cy3对以上样品进行染色后,应用NanoDrop ND-1000对染色样品进行染色效率检测并计算后发现,以上样品染色均合格,满足进行基因芯片检测要求。应用WholeHuman Genome (4x44k)Oligo Microarray Kit对所取样品进行杂交后,共检测出mRNA 41093条,经过Quality Ccontrol系统检测后,杂交芯片质量均合格。应用Oneway-ANOVA找出相关功能mRNA 2472条,p≤0.05。应用GO Analysis系统分析找出Extracellular相关功能mRNA 300条,p≤0.1。再次用GO Analysis系统从此300条mRNA中找出与免疫功能相关的mRNA共41条。应用GeneSpring GX 11.0.2系统观察检测出的数据发现,以上41条有关免疫的mRNA在CRC患者,不同部位结肠及直肠正常黏膜中的表达水平,发现在41条与免疫有关的mRNA中,mRNA总体表达水平与所取标本距肿瘤距离呈正相关,逐渐升高的有21条、mRNA总体表达水平与所取标本距肿瘤距离成呈负相关,逐渐降低的有5条、mRNA总体表达水平变化不明显的有15条。结论:以上结果表明,结肠癌患者正常结肠及直肠黏膜中许多有关免疫的mRNA在不同部位正常结肠及直肠黏膜中表达的水平不同,证明肿瘤的发生与人体免疫有着密切的关系。并且部分有关免疫的mRNA的表达水平会随着与肿瘤距离的增大而逐渐升高,所以说部分有关免疫的mRNA在结肠肿瘤的发生过程中有可能存在着一种“逃逸”现象,基因芯片可以检测出这种现象,找出对这种现象干预的方法有可能对临床治疗结肠癌有一定的帮助,并且通过利用mRNA芯片表达谱技术观察免疫相关mRNA的表达情况有可能有助于结肠癌的早期诊断。