论文部分内容阅读
目的:1.研究miR-672-5p在不同浓度激素干预大鼠成骨细胞后的差异表达。2.研究长效、中效、短效三种激素影响miR-672-5p在大鼠成骨细胞的差异表达。3.研究miR-146a-5p在不同类型股骨头坏死患者中的表达差异。方法:1.SD乳鼠原代成骨细胞培养,取第三代大鼠成骨细胞加入DMEM高糖培养基,分为空白组和激素组,激素组注射用甲泼尼龙浓度为10-3 mol/L组、10-4 mol/L组、10-5mol/L组及10-66 mol/L组。每组分别做细胞总RNA提取,逆转录反应,定量PCR反应;算出2^（-△△Ct）值评估miR-672-5p的表达量。2.SD乳鼠原代成骨细胞培养,取第三代大鼠成骨细胞加入DMEM高糖培养基,并分别加入终浓度为10-55 mol/L的甲泼尼龙、氢化可的松及地塞米松和空白对照组;四组分别细胞总RNA提取,逆转录反应,定量PCR反应;算出2^（-△△Ct）值评估miR-672-5p的表达量。3.选择2016年11月至2017年3月广州中医药大学第一附属医院关节骨科收治入院需要行人工全髋关节置换的激素性/酒精性/创伤性股骨头坏死患者各6名作为观察组,同时招募正常健康人群6人作为对照组。采集每组患者的血清,四组分别血清总RNA提取,逆转录反应,定量PCR反应;算出2^（-△△Ct）值评估miR-146a-5p的表达量。结果:1.miR-672-5p在10-3 mol/L组,10-4 mol/L组,10-55 mol/L组及10-66 mol/L组中的表达量分别为空白组的6.16倍、2.56倍、2.35倍及1.26倍,且在浓度最高的10-3mol/L组中,其表达量显著升高。2.与空白组相比,三组激素的miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达量（2^（-△△Ct））均显示出上调,其中甲强龙组为2.35,提示表达最高。甲泼尼龙组与氢化可的松组和地塞米松组分别有明显差异,但氢化可的松组（1.50）与地塞米松组（1.53）无明显差异。3.与健康人群组相比,miR-146a-5p在股骨头坏死患者中的表达量下调。其中,在激素性股骨头患者血清中的表达量（2^（-△△Ct））为3.12±2.56,酒精性股骨头坏死患者血清中的表达量为4.48±3.93,创伤性股骨头坏死患者血清中的表达量为3.65±1.94,正常健康人群血清中的表达量为6.68±3.61。经方差分析,F=1.71,p=0.1965>0.05,故尚不能认为各组之间存在统计学差异。结论:1.（1）miR-672-5p在不同浓度激素干预大鼠成骨细胞中的表达量不同,且随激素浓度的增加而提高,这为我们下一步对其进行靶基因和信号通路研究提供了新的证据支持;（2）当干预的激素浓度增加到10-3mol/L时,与其他浓度组相比,其表达量明显升高,因而我们推断10-3mol/L浓度的注射用甲泼尼龙可能是临床上导致发生激素性股骨头坏死风险增加的临界值,但还有待进一步的研究证实。2.中效激素的miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达量最大,提示甲泼尼龙在激素性股骨头坏死中可能起重要角色。3.miR-146a-5p在不同类型股骨头坏死和正常健康人群中表达量具有差异,但差异无统计学意义,因此,miR-146a-5p不能作为激素性股骨头坏死的特异性表达基因对其进行进一步功能验证和相关机制的研究。