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苹果树腐烂病(Apple canker)是由黑腐皮壳属真菌(Valsa mali)引起的一种枝干腐烂病害,称为苹果树―癌症‖。目前针对该病害还没有有效的防治措施,主要是因为对其致病活性物质还不甚了解。为了揭示该病菌的致病活性物质,本研究对野生型苹果树腐烂病菌03-8进行发酵培养并分离其活性物质。取得的研究结果如下:1.利用大孔树脂XAD-2分离03-8发酵滤液,以不同比例(v/v)的甲醇水为洗脱剂,洗脱获得五个馏分段,用烟叶进行生物测定发现,馏分段Ⅳ(75%的甲醇水洗脱液)导致烟叶的坏死活性最好。2.以馏分段Ⅳ为试样,分别以苋菜、莴苣、萝卜种子,烟草叶片和苹果叶片为生测对象进行生物活性测定,比较确定生物活性测定的敏感材料。结果表明,苋菜、莴苣、萝卜种子的幼根和芽的伸长对馏分段Ⅳ不敏感,烟草叶片和苹果叶片均表现出活性,但因烟草叶片比苹果叶片容易得到,因此本实验均采用烟草叶片为活性追踪的生测材料。3.以烟叶为测试材料,采用注射接种法检测多种溶剂对其致死活性。结果表明,20%的丙酮、10%的甲醇和乙醇不会引起烟草叶片坏死,因此本实验采用20%的丙酮、10%的甲醇和乙醇作为活性测定的溶剂。4.在MS培养基中分别以蔗糖、淀粉、麦芽糖、葡萄糖为碳源,发酵培养03-8,对不同碳源发酵滤液的馏分段Ⅳ进行活性测定,结果发现,蔗糖为碳源时馏分段Ⅳ活性最高;将培养基分别调pH为2、3、4、5、6、7、8、9、10培养03-8,对不同pH发酵滤液馏分段Ⅳ进行活性测定,结果发现,pH 6时馏分段Ⅳ活性最好。5.在选定的培养条件(碳源和pH)下培养03-8,将发酵滤液经过大孔树脂处理,所得馏分段Ⅳ用二氯甲烷萃取,薄层层析和高效液相色谱等手段进行分离,得到1个化合物。采用1H-NMR、13C-NMR、DEPT135、HMQC谱进行结构分析,确定为1-(3-乙烯基苯基)-1,2-乙二醇。6.对分离得到的1-(3-乙烯基苯基)-1,2-乙二醇利用烟草叶片和苹果叶片分别进行活性测定,结果显示,该物质对烟草叶片和苹果叶片活性不显著。在枯草芽孢杆菌的液体培养基中加入该物质,在12 h后枯草芽孢杆菌的生长量比对照低50%,表明该物质对腐烂病菌的拮抗微生物---枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用。7.利用生物碱检测试剂碘—碘化钾试剂、碘化铋钾试剂、苦味酸、磷钼酸-乙醇溶液、钼酸铵-浓硫酸、改良碘化铋钾、浓硝酸检测发酵滤液中的生物碱成分,结果表明,03-8发酵滤液中含有生物碱。