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卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤类型之一,死亡率高。因此,对卵巢癌早期诊断、治疗及预后的研究迫在眉睫。越来越多的证据表明,lnc RNAs在卵巢癌发生发展过程中起重要的调控作用。然而,卵巢癌中lnc RNA的差异表达及其作用机制尚未得到广泛研究。本研究提取GEO数据库中有关卵巢癌的芯片数据,研究卵巢癌样本与正常卵巢上皮样本的m RNAs和lnc RNAs表达谱的差异。通过DAVID 6.8数据库对差异表达m RNAs进行GO富集和KEGG分析。结果表明,差异表达m RNAs与“cell division”“plasma membrane”“protein binding”等功能密切相关,主要富集在“Wnt signaling pathway”“Pathways in cancer”“TGF-beta signaling pathway”“Rap1 signaling pathway”等癌症相关通路。lnc RNAs差异分析发现,与正常卵巢上皮组织相比,lnc RNA UCA1在卵巢癌样本中表达量显著上调。并且UCA1在TCGA数据库的卵巢癌样本中变化量为16%,表明其与卵巢癌有很大的相关性,故确定UCA1为目标lnc RNA。基于以往研究报道,我们将侧重于UCA1的ce RNA机制展开研究。基于lncRNA-miRNA在线预测工具Reg RNA 2.0及mi RNA靶基因预测数据库(mi RDB、mi RTar Base、Target Scan Human 7.2)预测UCA1相关的ce RNA调控网络,为后续靶基因的选择提供了范围。生信分析和文献检索结果显示“UCA1/mi R-99b-3p/SRPK1”调控路线在卵巢癌中具有很高的研究价值。为验证生物信息学预测结果,我们成功构建了p RL-UCA1-WT/p RL-SRPK1-WT、p RL-UCA1-MUT/p RL-SRPK1-MUT 4种重组载体。双荧光素酶活性检测结果表明UCA1与SRPK1 3’UTR上皆存在mi R-99b-3p的直接结合位点。因此,mi R-99b-3p可能参与UCA1对SRPK1表达的调控。为了进一步验证以上结果,更好地了解UCA1、mi R-99b-3p对SRPK1的调控方式,我们使用mi R-99b-3p mimic/inhibitor、si-UCA1或si-UCA1+mi R-99b-3p inhibitor处理A2780细胞48小时,并采用实时荧光定量PCR和western blot对SRPK1 m RNA和蛋白表达水平进行了评估。结果发现转染mi R-99b-3p mimic的细胞中,SRPK1 m RNA表达水平仅为阴性对照组的0.7倍,其蛋白表达水平为阴性对照组的0.56倍,均显著下调。同样地,转染mi R-99b-3p inhibitor的细胞中,SRPK1 m RNA表达量为阴性对照组的1.3倍,其蛋白表达量为阴性对照的1.37倍,均显著上调。可见mi R-99b-3p对SRPK1 m RNA和蛋白表达具有负调控。UCA1下调时,mi R-99b-3p表达量显著上升;mi R-99b-3p过表达抑制了UCA1的表达,而mi R-99b-3p敲低有相反的效果。这表明UCA1与mi R-99b-3p表达水平呈负相关。此外,si-UCA1可抑制SRPK1 m RNA和蛋白的表达,而mi R-99b-3p inhibitor可一定程度上逆转si-UCA1对SRPK1表达的抑制作用。可见mi R-99b-3p参与UCA1对SRPK1表达的调控。为探究UCA1/miR-99b-3p对A2780细胞增殖和凋亡的影响,我们将mi R-99b-3p mimic/inhibitor、si-UCA1或si-UCA1+mi R-99b-3p inhibitor转入A2780细胞,使用MTT和细胞凋亡检测试剂盒测定各处理组细胞的增殖和凋亡情况。检测结果发现mi R-99b-3p过表达降低了A2780细胞的存活率,而mi R-99b-3p沉默可提高细胞的存活率。可见mi R-99b-3p可影响细胞的存活率。此外,si-UCA1可降低细胞存活率,mi R-99b-3p inhibitor可部分逆转si-UCA1对细胞存活的抑制作用。而不同处理组细胞的凋亡并无明显差异。综上所述,本研究揭示了一种新的ceRNA调控途径,即UCA1可通过竞争结合mi R-99b-3p调控SRPK1的表达,这可能为卵巢癌的治疗提供新的潜在靶点。