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本试验以牡蛎为原料,选用适合的蛋白酶对其进行水解,水解液经过初步分离纯化后,得到血管紧张素转换酶抑制肽(ACEIP)。本论文主要包括以下几个方面的工作。1.建立高效液相色谱法(HPLC)快速检测血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的方法。HPLC检测条件为:以ODS C18柱(5μm,150 mm×4.6 mm)为色谱柱,乙睛-水(20:80,V/V,含0.5‰甲酸)为流动相,流速1 mL/min,检测波长为228 nm。结果表明:马尿酸在0.1μg/mL ~500μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数r = 0.9999;平均回收率为89.77% ~ 99.57%,RSD为0.01% ~ 1.52%。不同的ACE抑制剂检测结果证明该方法操作简便快速、重现性好、准确度高,可以作为ACE抑制剂体外活性的检测方法。2.采用检测ACE酶活性的HPLC法,对自制猪肺ACE酶催化反应条件进行了优化,结果表明ACE与底物HGG的最佳反应条件为:底物HGG和ACE的最适反应浓度分别为5 mmol/L和12.5 mg/mL,反应时间30 min。以水解度(DH)为指标,测定了时间因素对不同蛋白酶酶解牡蛎蛋白的影响,表明4 h时水解基本完全,中性蛋白酶水解度最高,达到89.88%,木瓜蛋白酶水解度最低,为34.51%。探讨了牡蛎蛋白的水解度与ACE抑制活性的关系,证明水解15 min后,酶解产物ACE抑制率可达较高水平,随时间延长而缓慢增加或减少;其中胃蛋白酶水解牡蛎蛋白的酶解物对ACE的抑制率最高,1200 U/g底物的添加量、水解4 h的条件下,其抑制率可达96.99%,且酶解物可保持至少12 h内稳定存在不被水解。3.胃蛋白酶水解产物经G75凝胶色谱分离可得A、B两个蛋白峰,SDS-PAGE分析表明具ACE抑制活性的B峰分子量在6 kDa以下,用G25凝胶层析分离B峰得到一个C峰,尝试用反相高效液相色潽法（RP-HPLC)进一步分离纯化,在优化的色谱条件下(色谱柱:ODS C18柱(5μm, 150 mm×4.6 mm),流动相:乙睛-水(15:85,V/V,含0.5‰磷酸),流速0.8 mL/min,检测波长:265 nm)分离得到三个峰,用MALDI-TOF-MS测定了三个峰的分子量,其主要组分的分子量分别为973.583 Da、1086.715 Da、1353.821 Da;DSC熔点测定结果也表明,各峰组成并非单一组分,可能由一种短肽为主的多种短肽构成,故有待进一步纯化。