雌激素对椎体和长骨骺板生长代谢差异性作用的实验研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:alex851123
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目的:研究幼年雌性大鼠卵巢切除后及雌激素补充替代治疗对大鼠脊柱和下肢长度比较、椎体和长骨骺板相关基因表达特点及骺板组织学差异特点,研究探索可靠稳定的小鼠脊柱和四肢骺板原代软骨细胞分离培养方法,探讨骺板软骨细胞在体外低浓度血清培养下增殖及胶原生成的情况。探讨不同浓度梯度雌二醇和雌激素受体阻断剂对椎体和长骨骺板软骨细胞增殖、分化、胶原生成方面的特点和部位特异性差异,方法:(1)选择1周龄体重相近的雌性大鼠进行假手术(Sham)、卵巢切除(OVX)和卵巢切除+雌激素(OVX+E2)不同处理,检测各组血清雌二醇浓度水平、骺板组织Col II、Col X、Sox-9、Runx-2基因水平、骺板组织组织化学染色,X线片测量椎体和长骨相应的长度。(2)采用胰酶和胶原酶改良序贯消化法分离、培养小鼠骺板软骨细胞,采用CCK-8、PCR和Western Blot测定低浓度血清培养下骺板软骨细胞增值曲线、Col II和Col X表达情况。(3)使用不同浓度梯度雌二醇和不同雌激素受体阻断剂刺激椎体和长骨骺板软骨细胞,使用CCK-8法测定椎体和长骨骺板软骨细胞在不同浓度雌二醇刺激下的生长曲线,使用实时荧光定量PCR法、Western blot法、免疫荧光染色测定不同浓度梯度雌二醇和不同雌激素受体阻断剂影响椎体和长骨骺板软骨细胞在Col II和Col X表达差异性的影响。结果:(1)术后OVX组大鼠血清雌二醇浓度、椎体和长骨骺板Alcian Blue染色高度、骺板组织的Col II、Col X、Sox-9、Runx-2基因水平均明显低于假手术组和OVX+E2组;OVX组大鼠X线片脊柱长度明显短于假手术组和OVX+E2组,而下肢长度无明显差异(P>0.05)。(2)在低浓度血清培养条件下,骺板原代软骨细胞生长曲线呈现先升后降的形态,(3)CCK-8、PCR和Western blot结果均表明不同浓度水平的雌二醇对椎体和长骨骺板软骨细胞的细胞活力、Col II和Col X的表达有促进作用,在10-7M水平最明显;而长骨骺板软骨细胞比椎体骺板软骨细胞对雌激素刺激反应的效应明显;雌激素介导不同的雌激素受体对骺板软骨细胞在Col II和Col X表达调控主要通过ERα受体结论:雌激素对于幼年大鼠椎体和长骨骺板增殖、分化、胶原生成和骺板高度方面有重要影响,雌激素缺乏对脊柱和四肢的骨生长代谢方面存在部位特异性差异特点,在低浓度血清培养条件下,骺板原代软骨细胞生长曲线呈现先升后降的形态。雌激素对椎体和长骨骺板软骨细胞的细胞活力、胶原生成方面有促进作用,在10-7M水平最明显;而长骨骺板软骨细胞比椎体骺板软骨细胞对雌激素刺激反应的效应明显;雌激素介导不同的雌激素受体对骺板软骨细胞在胶原形成方面主要通过ERα受体,而不是ERβ受体。
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