论文部分内容阅读
实验目的:Spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2(SSAT2)属于SSAT家族成员。研究发现,SSAT2并不同于SSAT家族其他成员一般参与多胺代谢。本课题组前期研究发现,SSAT2在小鼠睾丸中也有明显表达,且在busulfan处理小鼠睾丸中表达明显上调。因此,本课题拟研究SSAT2在小鼠睾丸中的表达定位情况,并制备SSAT2上调TM3 Leydig细胞株,探寻SSAT2在小鼠睾丸Leydig细胞中的功能。实验方法:采用免疫组化和免疫荧光实验定位SSAT2在小鼠睾丸中的表达。腹腔注射busulfan(30 mg/kg)制备睾丸受损小鼠模型,Real-time PCR实验检测小鼠睾丸中SSAT2 mRNA表达情况,Western blotting实验检测小鼠睾丸中SSAT2蛋白表达情况。体外busulfan处理TM3 Leydig细胞,Real-time PCR和Western blotting方法观察细胞SSAT2表达水平的改变情况。制备ssat2慢病毒,转染tm3leydig细胞,构建ssat2过表达细胞模型。采用mtt和fcm检测细胞生长活性和细胞周期,elisa实验测定细胞睾酮产生量,westernblotting分析ssat2参与的hcg诱导的睾酮产生的机制。实验结果:1.免疫组化结果显示ssat2表达于小鼠睾丸组织中的leydig细胞和sertoli细胞区域,免疫荧光显示ssat2定位于leydig细胞胞质。2.real-timepcr和westernblotting结果显示生殖受损小鼠睾丸及tm3leydig细胞中ssat2mrna及蛋白表达水平明显上调。3.成功构建慢病毒过表达细胞模型,mtt和fcm结果表明ssat2对小鼠tm3leydig细胞的生长活性具有抑制作用,可使细胞滞留于g0/g1期。4.elisa结果表明ssat2过表达可抑制hcg刺激的睾酮产生,westernblotting结果显示ssat2过表达可抑制hcg诱导的star蛋白水平的表达上调。实验结论:ssat2主要表达于小鼠睾丸leydig和sertoli细胞,busulfan处理可明显上调小鼠睾丸与tm3leydig细胞中ssat2的表达水平,提示ssat2与睾丸功能有关。成功制备ssat2过表达细胞株,ssat2过表达可抑制tm3leydig细胞生长活性并影响细胞周期,且能通过抑制hcg诱导的star表达上调进而影响睾酮产生。我们的结果表明,SSAT2可能通过影响睾丸Leydig细胞的功能而参与busulfan导致的小鼠睾丸功能损伤。