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SOX5在黑色素细胞色素基因的表达和促进黑色素生成中有着重要的作用。10年前研究发现了第一个SOX基因调节黑素细胞的发育,时至今日,我们已经陆续发现SOX5,SOX9,SOX10和SOX18都作为转录因子参与调控和调节关键的黑色素细胞基因。而本文研究的是SOX5在小鼠皮肤毛色中发挥的重要作用。为了探讨SOX5在小鼠皮肤毛色中的作用。本研究随机选取出生后12 d毛囊生长旺盛期的C57BL/6品系黑色、棕色、灰色小鼠各3只,分别采用了荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法对SOX5在黑色、棕色和灰色小鼠皮肤中的表达差异进行分析;并构建了 SOX5真核表达载体,运用体外转染的方法,转染小鼠黑色素细胞并检测与色素形成相关基因的表达水平,同时测定黑色素含量。主要的研究内容和结果如下:(1)采用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法对SOX5在黑色、棕色和灰色小鼠皮肤中的表达差异进行分析;免疫组织化学方法表明:SOX5在不同毛色小鼠皮肤中均有SOX5蛋白的表达,且其主要表达部位为毛囊外根鞘,黑色和灰色小鼠皮肤中荧光强度明显高于棕色小鼠皮肤。qRT-PCR结果表明:SOX5在黑色和灰色小鼠皮肤中mRNA相对表达量是棕色的8.12倍(P<0.01)和2.87倍(P<0.01);蛋白免疫印迹结果表明:在不同毛色小鼠皮肤的总蛋白可以与SOX5抗体发生免疫学阳性反应,通过对蛋白条带分析可知,SOX5在黑色和灰色小鼠皮肤中蛋白水平是棕色的2.46倍(P<0.01)和1.91倍(P<0.01)。由此可以看出,SOX5在不同毛色小鼠皮肤中表达量存在差异性,说明SOX5对毛色的形成有一定影响。(2)通过构建小鼠SOX5与MITF-M真核表达载体,在小鼠黑色素细胞中分别通过过表达SOX5与MITF-M,运用反向验证的方法来证明SOX5影响小鼠皮肤黑色素细胞MITF-M的表达。过表达SOX5后结果显示:与空载组对比,过表达SOX5后的MITF-M mRNA升高1.50倍(P<0.05);蛋白升高1.95倍(P<0.01)。过表达MITF-M后结果显示:SOX5的mRNA降低1.34倍(P<0.05):蛋白降低2.05倍(P<0.01)。两者表明,过表达SOX5促进MITF-M的表达,而过表达MITF-M抑制SOX5的表达。(3)为了进一步验证SOX5通过MITF-M调节黑色素细胞,我们验证了过表达SOX5后,SOX5对主要的色素生成基因TYR、TYRP1、TYRP2、PMEL以及OA1进行了 mRNA的表达差异、蛋白相对水平以及黑色素含量分析,结果表明:过表达SOX5后与对照组相比,相应基因的mRNA、蛋白表达以及黑色素含量均升高。以上结果表明:在小鼠皮肤黑色素细胞中,过表达SOX5基因可以促进MITF-M、TYR、TYRP1、TYRP2、PMEL以及OA1表达,进而促使黑色素生成量的增加。