研究目的:动脉粥样硬化(AS)是缺血性心脑血管疾病的主要病理基础。人源素(Humanin,HN)是一种来源于线粒体的机体内源性小分子多肽,动物实验表明外源性的S14G-HN(HNG)具有抗AS作用,而其机制知之甚少。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)引起的血管内皮细胞损伤是AS发生的关键性始动环节,ox-LDL还能通过以LOX-1为主的受体依赖性途径被血管内皮细胞摄取,进而损伤细胞。本研究拟在高脂饮食ApoE-/-AS模型小鼠上明确HN的抗AS作用,并在细胞模型上探讨该作用是否与HN抑制血管内皮细胞LOX-1受体介导的ox-LDL摄取有关。材料与方法:6周龄普通饮食的雄性C57BL/6小鼠作为对照组,同龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为高脂饮食组(HFD组),高脂饮食生理盐水注射组(HFD+saline组),高脂饮食HNG注射组(HFD+HNG组),16周后取主动脉弓包埋切片,HE染色。不同浓度HNG处理人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)12h,CCK8试剂盒检测HNG对细胞活性的影响。用不同浓度HNG预处理HUVECs 1 h,再用ox-LDL共同孵育HUVECs 12h,细胞比色脂质定量试剂盒检测HUVEC内胆固醇含量。不同浓度HNG预处理HUVECs 1h,再与Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-ox-LDL)共同孵育12 h,用流式细胞仪观察HUVECs的细胞内脂质聚集情况。Western blot检测ox-LDL和HNG对HUVECs的ox-LDL摄取受体LOX-1蛋白和ERK通路相关蛋白表达的影响,Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测HNG对细胞凋亡的水平的影响。结果:1.HE染色结果显示发现相对control组,HFD组小鼠主动脉斑块面积明显增大,HFD+saline组与HFD组斑块面积没有差异,HFD+HNG组斑块面积明显减小。2.CCK8试剂盒检测结果显示不同浓度HNG对HUVECs活性没有损伤。细胞脂质试剂盒和流式结果显示HNG能够浓度依赖性抑制ox-LDL诱导的脂质在HUVECs中蓄积。3.Ox-LDL浓度依赖性增加LOX-1表达,HNG抑制ox-LDL诱导的LOX-1表达增加。4.敲减LOX-1后,ox-LDL的摄取明显降低,HNG没有进一步降低Ox-LDL的摄取。5.Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测结果显示ox-LDL浓度依赖性增加HUVECs凋亡,HNG浓度依赖性减少HUVECs凋亡,LOX-1抑制剂抑制ox-LDL诱导的HUVEC凋亡,HNG不能进一步减少细胞凋亡。6.Ox-LDL时间以及浓度依赖性促进HUVECs ERK磷酸化,HNG抑制ox-LDL诱导的ERK磷酸化,ERK抑制剂PD98059抑制ox-LDL诱导的HUVECs的LOX-1表达增加以及细胞内脂质含量增加。结论:以上结果表明,HNG可以发挥抗AS的作用,它通过抑制内皮细胞ox-LDL摄取受体LOX-1降低HUVECs对ox-LDL的摄取,它对LOX-1的调控作用通过抑制ox-LDL诱导的ERK通路的激活发挥。