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目的 先天性马蹄内翻足(congenital clubfoot，CCF)是一种常见的严重影响足功能的先天畸形。大部分患儿需要手术治疗，其发病率约为1‰，目前其病因尚不清楚。遗传流行病学研究表明，先天性马蹄内翻足的遗传方式属于多基因遗传，其发生是遗传因素与环境因素共同作用的结果。我国对CCF的病因研究仅限于免疫组织化学、诱发电位及动物模型等方面，从基因水平研究其发病机理尚未见报道。近几年，国外有关胚胎发育的基因调控研究取得了初步进展，发现转录因子Hox基因(homeobox genes)是相关基因。目前在果蝇和鼠的基因敲除实验中发现Hox基因调节并参与胚胎后肢骨骼肌肉发育，也有Hox基因与人类肢体发育异常相关的报道，但先天性马蹄内翻足与Hox基因的关系报道较少。为了研究CCF与Hox基因的相互关系，本文以HoxD基因作为CCF的候选基因，选择HoxD基因内多态微卫星标记Hox4Ep，对65个核心家系进行等位基因检测分析，对32个杂合子父母核心家系进行了传递连锁不平衡检验(transmission disequilibrium test，TDT)，以探讨Hox基因D簇与先天性马蹄内翻足的关系。 方法 1．标本来源 收集65例CCF患者，均有典型的临床表现，经X光片及手术确诊，并排除其他畸形。取患儿及父母外周静脉血3ml，EDTA抗凝，常规酚／氯仿法提取基因组DNA。 2．微卫星DNA 选取HoxD簇基因内的一个二核苷酸重复的微卫星DNA标记Ho－c4Ep。Ho－c4Ep选自人类基因数据库（GDB入PCR引物由上海搏亚生物技术有限公司合成。 3．基因型分析 3．INR技术扩增微卫星DNA PCR扩增按常规方法，在p－200型扩增仪上进行，反应体系 25…。循环条件：94七变性40秒，55℃复性40秒，72b延伸40秒，30个循环。 3．2 电泳 取扩增产物10gi，经6％变性聚丙烯酸胺凝胶电泳分离等位基因，电泳条件：50吐＊、3－4h。用 0．2％AgNO。染色及 3％N82 CO。和0．5％甲醛溶液显色，双育法等位基因型判读。 4．统计学分析 建立TDT表格，采用SPSS10．0计算机软件，进行传递不平衡检验及相关分析。 结 果 1．收集65例核心家系中，有23例父母资料不全，难以进行基因分型者，作者将其排除。通过凝胶电泳做基因分型分析的核心家系共42例。 2．H。X4Ep位点稳定分离出12个等位基因，其片段分布在110一130hp 之间。 3．由于 TDT分析要求运用杂合子父母未传递给子代的等位基因作对照，故排除纯合子父母家系10例，最后32个家系可用于TDT分析。 4．根据电泳带型建立TDT表格。 5．微卫星DNA Ho－c4Ep等位基因 12，杂合子型父母向子代传递等位基因12的数目为15，未传递等位基因数目为6，差异显著（X＝4．614，P＜0·05）。 ·2· 结 论 二．CCF与H。x4EP位点存在传递连锁不平衡，提示HOxD基因可能是先天性马蹄内翻足的易感基因。 2．HOx4Ep位点可以稳定分离出12个等位基因，其片段分布在 110 一130hp 之间。