【摘 要】
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毛细管电泳是近年来发展迅猛的一种液相微分离分析技术。由于其独特的优点,如高效率,高灵敏度,分析速度快,极低的试剂消耗量,以及可以和多种检测器连接,毛细管电泳已经成为酶促反应
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毛细管电泳是近年来发展迅猛的一种液相微分离分析技术。由于其独特的优点,如高效率,高灵敏度,分析速度快,极低的试剂消耗量,以及可以和多种检测器连接,毛细管电泳已经成为酶促反应研究的有效工具,被广泛应用于几乎所有的酶分析研究方面。本论文基于毛细管电泳技术,提出了一种针对酶催化反应全程连续在线分析的新方法,并将该方法应用在对谷丙转氨酶(GPT)催化的酶反应及其抑制反应进行研究。该装置设计简单,由两根同轴水平固定于样品池,相距5微米的毛细管组成。分离电压周期性的开关完成在线直接进样以及连续CE分离分析,避免了毛细管入口更换缓冲溶液和样品溶液时造成的机械干扰。缩短的有效分离距离提高了分离效率,缩短了分析时间,而且装置具有高度的重现性,在酶反应分析以及催化反应动力学研究上具有很大的优势和潜能。本论文的工作主要包括以下几方面:(1)提出并建立酶反应动力学连续在线监测的CE分析装置,探讨连续在线进样和CE分析过程。(2)对Ala和Glu的标准混合物进行连续在线CE分析,通过研究不同电压、不同进样时间对分离效果的影响以及重现性实验,以确定方法的可行性以及优化最佳分离条件。(3)利用连续在线CE分析方法对GPT催化的酶反应,进行酶反应动力学研究,并对线上和线外测得的动力学数据进行比较。(4)利用连续在线CE分析方法研究GPT催化的酶抑制反应动力学,包括竞争性和非竞争性可逆抑制反应和不可逆抑制反应,并对线上和线外测得的抑制反应动力学数据进行比较。
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