【摘 要】
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目的:通过分析TCGA数据库及利用体外细胞功能学实验,初步探究miR-106b-5p在膀胱癌中的作用。方法:本研究通过对TCGA数据库中膀胱癌组织及癌旁组织miRNAs测序数据进行分析,筛选出膀胱癌组织与癌旁组织中差异表达的miRNAs,并通过结合患者的临床数据,分析出与膀胱癌患者预后相关的miRNAs;其次,我们挑选出在膀胱癌中被研究的较少miR-106b-5p初步探究其在膀胱癌中的作用。通过q
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目的:通过分析TCGA数据库及利用体外细胞功能学实验,初步探究miR-106b-5p在膀胱癌中的作用。方法:本研究通过对TCGA数据库中膀胱癌组织及癌旁组织miRNAs测序数据进行分析,筛选出膀胱癌组织与癌旁组织中差异表达的miRNAs,并通过结合患者的临床数据,分析出与膀胱癌患者预后相关的miRNAs;其次,我们挑选出在膀胱癌中被研究的较少miR-106b-5p初步探究其在膀胱癌中的作用。通过q RT-PCR检测miR-106b-5p在膀胱癌组织及细胞系中的表达量;在膀胱癌细胞T24转染miR-106b-5p inhibitor后,通过CCK8、EDU、流式细胞技术、细胞划痕、Transwell等实验研究其对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响。通过生物信息学方法预测miR-106b-5p可能的靶基因,并通过western blot及荧光素酶报告基因实验进行验证。结果:通过对TCGA数据库中膀胱癌相关数据的分析,我们筛选出473个差异表达的miRNAs,其中高表达的有379个,低表达的有94个;通过结合临床数据进行预后分析发现,差异表达的miRNAs中,有6个与膀胱癌的预后显著相关;其中miR-106b-5p和miR-141-3p在膀胱癌中高表达,且高表达的膀胱癌患者预后较差,低表达的膀胱癌患者预后较好;而miR-99a-5p、let-7c-5p、miR-145-5p及miR-143-3p等在膀胱癌中低表达,且低表达的膀胱癌患者预后较差,高表达的膀胱癌患者预后较好。我们从中挑选出在膀胱癌中研究较少的miR-106b-5p进行研究,通过q RT-PCR检测发现,与癌旁组织相比,miR-106b-5p在膀胱癌组织中表达量较高（P<0.05）。同时,与正常人类膀胱上皮细胞（SV-HUC-1）相比,miR-106b-5p在膀胱癌细胞（T24、J82）中表达量较高（P<0.05）。通过CCK8、EDU、流式细胞技术、细胞划痕、Transwell等实验发现,转染miR-106b-5p inhibitor后膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭能力下降而凋亡率升高（P<0.05）。通过生物信息学方法预测CDKN1A可能是miR-106b-5p下游的靶基因,并通过western blot实验发现转染miR-106b-5p inhibitor后膀胱癌T24细胞中CDKN1A的表达量明显升高。通过荧光素酶报告基因实验进行验证,我们发现共转染miR-106b-5p inhibitor和CDKN1A-WT质粒的T24细胞荧光素酶活性明显升高,而共转染miR-106b-5p inhibitor和CDKN1A-MUT质粒的T24细胞荧光素酶活性变化不明显。结论:miR-106b-5p在膀胱癌组织和细胞系中高表达,且下调miR-106b-5p可以抑制膀胱癌的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。这表明miR-106b-5p在膀胱癌中可能是一个促癌基因。同时,CDKN1A是miR-106b-5p的下游靶基因,miR-106b-5p在膀胱癌中可能通过靶向CDKN1A来发挥促癌作用。
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