【摘 要】
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胰岛素样生长因子（Insulin-like growth factors,IGF1）是动物生长发育的候选基因,研究发现猪IGF1存在较多碱基变异,并与猪生长性状密切相关。前期研究发现猪IGF1启动子区中存在多态性的（CA）n微卫星及poly-T微卫星位点,且（CA）n微卫星可能形成Z-DNA结构并影响IGF1转录表达。本研究关注于IGF1启动子区的（CA）n微卫星变异,首先将（CA）n微卫星与po
【基金项目】
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广州市科技计划项目《启动子区微卫星（CA）n变异影响猪IGF-1基因表达及生长性状的作用机制研究（201707010001）》
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胰岛素样生长因子（Insulin-like growth factors,IGF1）是动物生长发育的候选基因,研究发现猪IGF1存在较多碱基变异,并与猪生长性状密切相关。前期研究发现猪IGF1启动子区中存在多态性的（CA）n微卫星及poly-T微卫星位点,且（CA）n微卫星可能形成Z-DNA结构并影响IGF1转录表达。本研究关注于IGF1启动子区的（CA）n微卫星变异,首先将（CA）n微卫星与poly-T进行连锁分析,并将纯合单倍型（CA）n-Tn与猪生长性状进行关联分析,然后通过构建不同（CA）n-Tn单倍型、微卫星变异双荧光素酶重组载体,分析单倍型及微卫星DNA变异对IGF1启动子活性的影响;最后通过凝胶阻滞实验探究（CA）n微卫星能否形成Z-DNA构象。本研究结果有望进一步挖掘猪生长发育相关的功能性分析标记。研究结果如下:（1）（CA）n-Tn连锁分析表明:单倍型（CA）17-T11、（CA）18-T11、（CA）19-T11和（CA）20-T12纯合长白猪个体占群体0.23%、22.81%、16.13%和0.46%,（CA）18-T11和（CA）19-T11为优势单倍型。单倍型（CA）n-Tn与长白猪初生重、达115 kg日龄、达115 kg平均日增重、达115 kg背膘厚无显著关联,但与体长性状显著关联,（CA）17-T11纯合基因型个体体长显著高于（CA）19-T11和（CA）20-T12个体体长。（2）构建单倍型（CA）17-T11、（CA）18-T11、（CA）19-T11和（CA）20-T12双荧光素酶重组载体并转染至猪胎儿成纤维细胞,活性结果显示单倍型（CA）17-T11相对活性最高,（CA）18-T11和（CA）19-T11次之,（CA）20-T12的相对活性最低。（3）（CA）n微卫星缺失后单倍型片段只含T11或T12,结果显示T11的活性高于T12的活性,T11活性显著低于单倍型（CA）n-T11活性,而T12活性高于（CA）20-T12活性。poly-T缺失后单倍型片段只含（CA）17或（CA）18或（CA）19或（CA）20微卫星,活性结果显示（CA）17、（CA）18、（CA）19、（CA）20的活性高于相应（CA）n-Tn的相对活性,且随着n的增加IGF1基因相对活性逐渐降低。而（CA）n微卫星及poly-T同时缺失后,其相对活性均低于（CA）n-Tn、（CA）n和Tn的相对活性。（4）猪ZBP1蛋白存在两个Z?结构域,人重组ZBP1蛋白不能与p MD-18T重组载体发生阻滞,（CA）n微卫星是否形成Z-DNA还需更多研究。综上可得结论:不同（CA）n-Tn单倍型影响IGF1启动子转录活性进而影响长白猪生长性状;随着（CA）n微卫星重复数的增加,IGF1转录活性逐渐降低,（CA）n微卫星可能与poly-T共同维持猪IGF基因转录活性。
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