PLGA-rPr纳米疫苗对小鼠过敏性鼻炎特异性免疫治疗的疗效研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:st841004
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目的:探讨以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)包裹的重组软叶针葵花粉过敏原profilin的纳米疫苗对软叶针葵花粉过敏性鼻炎小鼠模型的治疗效果。  方法:利用乳化挥发法制备出以PLGA包裹软叶针葵花粉过敏原重组蛋白的微粒(PLGA-rPr)疫苗,并鉴定其特性。30只Balb/c小鼠,随即分为正常组、AR模型组、PLGA对照组、rPr治疗组和PLGA-rPr治疗组。先以软叶针葵花粉粗提蛋白经腹腔注射致敏小鼠(50μg/次,每7天一次,连续3次),建立一个软叶针葵花粉过敏性鼻炎的Balb/c小鼠模型,正常组以PBS替代。末次致敏一周后经腹部皮下注射给药分别治疗各组小鼠(50μg重组蛋白/次,每3天一次,连续3次),正常组与哮喘模型组以PBS代替。治疗一周后予软叶针葵花粉粗提液滴鼻激发。在激发后30分钟内观察治疗小鼠抓鼻、流涕和喷嚏等鼻部症状,24h后评估其气道高反应性,并检测其血管通透性。激发后48h处死小鼠,立即取血,检测血清中过敏原特异性抗体IgG1、IgG2a和IgE水平,及测定脾细胞培养液中细胞因子IL-4、IL-10和INF-γ生成水平,并取鼻粘膜观察其形态学变化。  结果:⑴重组profilin蛋白表达序列正确,具有IgE结合力。⑵PLGA-rPr纳米疫苗颗粒圆滑,大小均一,分散性良好,粒径约180nm;包裹后的profilin蛋白其理化性质正常。⑶鼻部症状评分结果显示,与正常组相比,模型组和PLGA对照组小鼠鼻部症状明显,其评分显著增高(P<0.01),具体表现为擦鼻、打喷嚏次数和流涕程度显著增加。与模型组相比较,两个治疗组小鼠鼻部症状评分显著降低(P<0.01),但与正常组相比仍稍有增高。其中PLGA-rPr治疗组小鼠鼻部症状改善较rPr治疗组更明显。⑷气道高反应性检测结果显示,正常组小鼠的Penh值最低,AR模型组小鼠的Penh值最高,并且随雾化乙酰甲胆碱浓度增高而增高。与模型组相对比,接受PLGA-rPr疫苗治疗组和rPr治疗组的小鼠其气道高反应均显著减轻(P<0.01),尤以PLGA-rPr治疗组改善更明显。PLGA对照组检测结果则与模型组相比无显著性差异。⑸血管通透性结果显示,正常组小鼠脚掌颜色未出现明显变化,模型组和PLGA对照组小鼠脚掌颜色显著变蓝。与模型组相比,PLGA-rPr治疗组和rPr治疗组小鼠的脚掌颜色较浅,呈浅蓝色。其中,PLGA-rPr治疗组小鼠脚掌颜色较rPr治疗组更浅。⑹血清特异性抗体检测结果显示,与正常组相比,模型组和PLGA对照组小鼠血清内过敏原特异性IgE水平均有明显增高(P<0.05),血清特异性IgG1和IgG2a水平也有升高(无显著差异)。与模型组相比,两个治疗组小鼠血清特异性IgE水平均有明显降低(P<0.05),血清特异性IgG1和IgG2a则显著增高;其中PLGA-rPr治疗组血清特异性IgG1和IgG2a水平均极显著增高(P<0.01)。与rPr治疗组相比较,PLGA-rPr治疗组小鼠血清特异性IgE水平降低(无显著性差异),血清特异性IgG1及IgG2a水平极显著升高(P<0.01)。⑺经检测脾细胞培养上清液细胞因子产生情况发现,与正常组相比,模型组与PLGA对照组小鼠的脾细胞培养上清中IL-4、IL-10有显著增高(P<0.01),IFN-γ水平也有升高(无显著性差异)。与模型组相比,PLGA-rPr治疗组与rPr治疗组的IL-4产生明显减少(P<0.01),IL-10和INF-γ产生逐渐增多,其中PLGA-rPr治疗组INF-γ水平较模型组有显著增高(P<0.05)。PLGA-rPr治疗组与rPr治疗组相比,INF-γ产生水平升高(P<0.05),IL-10的产生也有增多,而IL-4的水平无显著性差异。⑻与正常组小鼠相比,模型组与PLGA对照组小鼠鼻粘膜上皮层内的嗜酸性粒细胞数量均显著增多(P<0.01)。与模型组相比,PLGA-rPr治疗组及rPr治疗治疗组的小鼠鼻粘膜内浸润的嗜酸性粒细胞数量均有明显减少(P<0.01)。与rPr治疗组相比较,PLGA-rPr治疗组小鼠鼻粘膜上皮层内嗜酸性粒细胞数量减少(P<0.05)。  结论:①腹腔注射软叶针葵花粉粗蛋白能使BALB/c小鼠致敏,且致敏性较强;②PLGA-rPr过敏原疫苗通过抑制血清特异性IgE生成、促进特异性IgG1和IgG2a产生和Th2反应向Th1反应转变对小鼠软叶针葵花粉过敏性鼻炎比传统的以Al(OH)3为佐剂的疫苗rPr具有更好的治疗作用,以PLGA为佐剂的疫苗有望成为过敏原特异性免疫治疗的新选择。
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