人红细胞膜上以带3蛋白为核心的蛋白质复合体研究

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带3蛋白(Band3)是人红细胞膜上最主要的蛋白质,其基因位于第17号染色体的q21-q22区段。生物膜膜脂主要分为三类:甘油磷脂,鞘脂以及胆固醇.脂筏的蛋白质大多与信号转导相关,其特有的蛋白主要有三大类:caveolin、flotillin和stomatin。带3蛋白是红细胞膜上最主要的蛋白,而flotillin是红细胞脂筏上最主要的蛋白.为了研究以带3蛋白为核心的膜蛋白复合体,本文首先建立了可靠的invitro实验系统,将重点转向克隆和表达cdb3,并成功地表达了5种融合了不同接头的重组cdb3。经过优化表达条件,并通过离子交换层析、亲和层析和分子筛纯化,得到了大量纯度超过98%的重组蛋白。通过SDS-PAGE和Westernblot,我们验证了重组cdb3的浓度和纯度;通过质谱实验,精确测定了重组cdb3的分子量;通过cdb3的pH依赖性蛋白质内禀荧光实验,证实了重组cdb3的结构和从人红细胞膜上提取的cdb3类似;通过与protein4.2C3片段的pull-down实验,发现重组蛋白和从红细胞中提取的cdb3活性相似;通过与ankyrinD34片段的pull-down实验,证实了重组cdb3和ankyrin的相互作用也受pH调控,且不受溶液的离子强度影响。随后通过pull-down实验和二维电泳,得到了和重组cdb3相互作用的红细胞膜蛋白谱。除此之外,我们还选取了一些特定蛋白,进行了原核表达,并初步研究了它们与带3蛋白或cdb3之间的相互作用。我们的研究从一个侧面证明了cdb3能与多种蛋白相互作用,红细胞膜上存在着以带3蛋白为核心的红细胞膜蛋白复合体。以带3蛋白为核心的复合体将大大增加红细胞内各种生物反应的速度和特异性。通过带3蛋白和ankyrin所介导的细胞膜和细胞骨架的相互作用,将各种生物反应定位于红细胞的特定区域,并主要通过pH的改变对相关反应进行调控。
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