转基因食品基因芯片检测及鉴定方法的建立

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为保障我国转基因食品标识制度的顺利实施,本文选取了已经或即将商业化种植的转基因玉米MIR162、BVLA430101、MON88017,转基因大豆MON89788、GTS40-3-2,转基因油菜MS1、RF1为研究对象,应用寡核苷酸基因芯片技术建立了7种转化事件特异性检测方法。本研究主要分为以下四个部分:1、第一章综述了转基因技术在农业生产和食品工业上的应用,不同国家间的转基因标识制度比较以及常用的转基因检测技术,并简要介绍了本文研究对象的背景材料。2、根据外源基因与植物基因组DNA的重组结构,利用Primer Express3.0软件分析并设计MIR162、BVLA430101、MON88017、MON89788、GTS40-3-2、MS1、RF1转化事件特异性引物,并建立了PCR检测方法。特异性与灵敏度验证结果表明,所建立的七种检测方法特异性强,灵敏度较高(0.1%)。同时,为测试转基因玉米MIR162定性PCR的特异性、灵敏度和重演性,在全国选择6家通过“双认证”的转基因生物安全检测机构对该标准文本进行循环验证、检验测试和综合评价。验证过程中,6家验证单位在MIR162含量为0.1%及以上的样品中均扩增出清晰的目的条带,表明该定性检测方法灵敏度较高,为0.1%,上述结果证明该方法具有良好的特异性、灵敏性和重演性,适合作为该玉米品系转基因成分检测的国家标准。3、根据定性PCR的扩增靶序列设计40bp大小的基因芯片探针,建立了上述7种转基因品系基因芯片检测方法,特异性和灵敏度验证证明所设计的探针对PCR扩增产物识别的特异性强,灵敏度高(0.01%)。4、利用复合PCR-基因芯片联用技术,建立了一个三重PCR检测体系(MIR162、MON89788、18S rRNA)和两个四重PCR检测体系(MIR162、MON88017、MON89788、18S rRNA和MON88017、MS1、RF1、18S rRNA),进一步提高了检测通量。
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