论文部分内容阅读
毛细管内生物大分子的固定化与应用在分析化学研究中具有重要意义。蛋白质固定化的毛细管电色谱可以提高待测物的分离效果。酶固定化的毛细管微反应器可以进行底物、酶抑制药物、蛋白质肽谱的快速分析。抗体固定化的毛细管可以对待测物进行预富集与纯化,提高分析的灵敏度,排除干扰物的影响。
固定化载体与固定化方式是毛细管内生物大分子的固定化的关键问题。本论文在前人研究的基础上,主要采用一种制备步骤简单、比表面积大、结构刚性的聚甲基丙烯酸酯载体,以及使用一种步骤简单、条件温和的唑酮环基固定化方式,对蛋白质、酶、抗体等生物大分子的固定化进行了以下几方面的工作:
(1)牛血清白蛋白偶联的多孔层聚合物开管(BSA-PLOT)毛细管:为了提高开管型毛细管电色谱的比表面积与分离效果,将蛋白质偶联毛细管与聚合物修饰毛细管两种技术进行组合,首次制备了BSA-PLOT毛细管,与其它对照型的毛细管对比,明显提高了三种氨基酸的分离效果,达到基线分离。
(2)酶固定化的毛细管微反应器:为了进一步了解这种聚合物对生物大分子的偶联情况,以聚甲基丙烯酸酯整体床为载体,将辣根过氧化物酶固定化,制备了酶固定化的毛细管微反应器,研究酶活性保留情况。在制备过程研究中,首次提出了一种更快速的制备方式。
(3)抗体固定化的毛细管用于免疫萃取与富集:首先,制备了抗吗啡多克隆抗体,测定了抗体的各项性质。然后,将这种抗体固定化于毛细管前部分的聚甲基丙烯酸酯整体床,尝试在同一毛细管内对吗啡进行免疫亲和萃取与电泳分析的联用,使用紫外测定被萃取的吗啡。对整体床载体和洗脱剂都进行了研究。证明此抗体偶联的整体床对吗啡具有富集效果。
(4)为了提高开管毛细管的比表面积,本文还研究了树枝状分子修饰的开管毛细管电色谱。