A型流感病毒（Influenza A virus,IAV）是一种重要的人兽共患病病毒。IAV侵入宿主体内后,机体内通过合成并分泌炎性因子和趋化因子,形成全身或局部的炎症反应,以抑制并清除机体内的病毒。研究发现,依赖Caspase-1介导的炎症反应在宿主抗流感病毒感染及清除感染细胞的过程中扮演了重要的角色。PA-X蛋白在病毒感染时抑制宿主的天然免疫反应。PA-X蛋白在禽流感与哺乳动物流感中的长度不一致,疑似参与了病毒在跨种间传播过程中对新宿主的免疫适应过程。为探究在流感病毒感染中,PA-X蛋白对Caspase-1介导的炎症通路的影响,本研究用反向遗传技术,成功拯救了表达不同长度PA-X蛋白的两株重组病毒（pdm09＿PAX＿41,截短型和pdm09＿PAX＿61,全长型）,并进行了体外单核巨噬细胞（RAW264.7）的感染实验和Caspase-1基因敲除小鼠的感染实验。1.感染RAW264.7细胞后,使用荧光定量PCR检测到,在病毒感染后的12h、24 h、36 h、48 h,pdm09＿PAX＿61毒株与pdm09＿PAX＿41毒株均能引起炎性因子IL-1β、IL-18和TNF-α,及NLRP3通路相关的NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA转录水平上调,但pdm09＿PAX＿61引起的mRNA转录水平上调比pdm09＿PAX＿41更为明显,表明在单核巨噬细胞中,pdm09＿PAX＿61毒株比pdm09＿PAX＿41毒株能够诱导炎性因子基因产生更多的转录量,造成的炎症反应更为严重。2.病毒感染RAW264.7细胞18 h后,ELISA法检测到细胞外IL-1β分泌量显著升高,且pdm09＿PAX＿61组的IL-1β分泌量显著高于pdm09＿PAX＿41组;蛋白质免疫印迹实验结果显示,pdm09＿PAX＿61组的pro-Caspase-1表达水平低于pdm09＿PAX＿41组,而pro-IL-1β和IL-1β表达水平高于pdm09＿PAX＿41组,表明pdm09＿PAX＿61毒株较pdm09＿PAX＿41毒株促进pro-Caspase-1蛋白合成更多的NLRP3炎症小体,进一步促进更多的pro-IL-1β蛋白合成及IL-1β蛋白成熟与分泌。而加入Caspase-1抑制剂后,可以有效抑制Caspase-1的产生和IL-1β的成熟与分泌。3.与感染野生型小鼠对比,两株重组毒株均能造成Caspase-1基因敲除小鼠更严重的临床症状,并表现出更高的死亡率,小鼠体重下降更快、更早,体重恢复时间更慢、更长,并造成更严重的肺脏组织损伤。而pdm09＿PAX＿61毒株较pdm09＿PAX＿41毒株造成小鼠损伤更严重,与感染野生型小鼠呈相同规律,表明pdm09＿PAX＿61毒株较pdm09＿PAX＿41毒株对小鼠的致病性更强,病毒在小鼠体内停留时间更长。4.肺脏组织的相关蛋白和炎性因子检测,结果显示,病毒感染野生型小鼠后,pdm09＿PAX＿61组Caspase-1和IL-1βmRNA转录水平低于pdm09＿PAX＿41组,而合成的Caspase-1蛋白和IL-1β蛋白显著高于pdm09＿PAX＿41组,表明pdm09＿PAX＿61毒株较pdm09＿PAX＿41毒株更能促进肺脏中Caspase-1和IL-1β翻译、加工,形成成熟的蛋白,并分泌到肺脏中参与炎症反应,而敲除Caspase-1基因小鼠中仅检测到少量的IL-1β蛋白;Caspase-1介导的炎症通路相关的proCaspase-1蛋白和pro-IL-1β蛋白等变化趋势与细胞实验结论一致。本研究证实了pdm09 H1N1亚型猪流感病毒表达不同长度PA-X蛋白时,不同程度影响了Caspase-1介导的细胞炎症通路中相关蛋白和细胞因子的表达。通过深入了解PA-X蛋白对宿主的抗病毒炎症反应的具体调控作用,有助于我们更好的认识流感病毒躲避宿主免疫反应和适应新宿主的策略,同时为流感病毒炎症风暴的治疗提供新的依据。