灰树花菌质多糖分离纯化及其降血糖功能活性研究

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灰树花(Grifola frondosa)作为一种珍贵的食药用菌,当前已经备受科学家的关注,其菌丝体中的生物活性成分多糖更是科学研究的焦点。本文研究了对灰树花液态发酵的碳氮源调控,灰树花液态发酵培养条件分析和多糖提取条件分析,并对灰树花菌丝体多糖进行了降血糖和结构研究。研究结果如下:1.以糯米粉,马铃薯淀粉、玉米粉、蔗糖、麦芽糖和可溶性淀粉为碳源时,可以得出糯米粉作为碳源时菌丝体和多糖产量较优;在以氯化铵、硫酸铵、尿素、酵母粉、麸皮作为氮源时,可以得出在以麸皮为氮源时,菌丝体和多糖产量均为最高。2.以葡萄糖、蛋白胨、VitB1、KH2PO4为考察因素时,以胞外多糖为考察指标,得到的最佳液态发酵条件为:葡萄糖30g/L,蛋白胨5g/L,VitB1 1.5mg/L,KH2PO41.5g/L,此时得到灰树花胞外多糖可达32.13mg/100mL。3.以浸提时间、料液比、微波功率、微波时间为考察因素时,以提出的粗多糖为考察指标,得出最佳提取条件为:微波功率450W,微波时间4min,浸提时间4.5h,料液比1:45,此时,多糖提取率最高,多糖得率可达3.21%。4.通过Alloxan建立小鼠高血糖症模型,探讨了灰树花粗多糖的体内降血糖活性,结果表明,各处理组能改善糖尿病小鼠体重减轻、多食、多饮、多尿的“三多一少”病症;与高血糖模型组比较,GFP低剂量组与中药复方高剂量组具有显著的降血糖活性(P<0.05)。其中,中药复方高剂量组处理的小鼠27天后,其血糖值下调至10.94 mmol/L,达到糖尿病诊断标准11.1mmol/L以下。5..GFP经DEAE Sephadex A-50柱层析分离纯化得到三个主要的多糖组分,分别命名为GFP1、GFP2和GFP3,并对GFP1和GFP2进行200-700nm波长扫描,确定其中蛋白、核酸和色素去除较为彻底,并对GFP1和GFP2进一步利用Sephadex G-200进行分离纯化,GFP1得到了单一吸收峰,证明其为单一多糖组分,运用红外光谱扫描和400M核磁共振氢谱研究了纯多糖GFP1的化学结构,表明GFP1具有多糖的特征。
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