RMND5A/B是本实验室克隆的人类心脏发育的候选新基因,其功能研究目前尚未有报道。为了研究人类新基因RMND5A/B在心脏发育过程中的作用,利用生物信息学结合分子生物学技术克隆了人类新基因RMND5A/B在果蝇的同源基因CG3295。生物信息学分析表明,CG3295位于果蝇2号染色体57B9-57B9区段,只包含一个外显子,具有一个转录本,其cDNA全长为1860bp,ORF全长1298bp,编码432个氨基酸。本人提取了野生型成虫果蝇的RNA,反转录成cDNA,设计引物克隆果蝇CG3295基因,将扩增的基因与pMD18-T克隆载体相连,构建成pMD18-T-CG3295质粒,经KpnI和XbaI酶切处理,将pMD18-T-CG3295克隆质粒中的CG3295基因转入pUAST表达载体,构建成pUAST-CG3295重组质粒,将pUAST-CG3295重组质粒和pΔ2-3转座酶质粒共同显微注射野生型白眼果蝇0h-0.5h受精胚胎,在子代通过mini-white标记(橙眼)筛选建立了12个转基因果蝇品系。为了检测每一个转基因品系中CG3295基因的表达情况,将纯合的转基因品系与Twi-GAL4和Act5C-GAL4品系分别杂交,收集子代0h-12h胚胎,提取蛋白并进行Western Blot检测,结果显示在·4号、7号与10号品系中CG3295蛋白的表达有显著增加。为了研究CG3295基因过表达时能否导致心脏突变表型,将10个转基因品系纯合体与Hand-GAL4;Hand-GFP品系杂交,在荧光显微镜下观察杂交后子代的心管和淋巴腺的表型特征,结果显示4号品系出现心管突变表型,其副心肌细胞呈现明显的缺失。总之,本文成功构建了12个CG3295基因转基因果蝇品系,初步分析表明,整合在基因组中的CG3295基因在转基因果蝇品系中能过量表达,在果蝇体内过表达CG3295基因时能导致心脏突变表型,表明CG3295基因与果蝇的心脏发育有关。