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研究背景目前自体脂肪移植已被广泛应用于治疗软组织缺损相关疾病和美容整形手术。然而,移植脂肪的存活率不稳定仍是困扰外科医生的难题。脂肪移植物存活的机制尚不完全清楚,各种细胞在组织重塑过程中的作用尚未完成阐明。当前脂肪移植物存活的主要理论认为,移植后组织重塑是由脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells,ADSCs）再生所推动的。因此目前研究重视脂肪干细胞而忽视脂肪细胞,对脂肪细胞结构与活性在移植后脂肪成活中的作用缺乏认识。本研究首先尝试获取脂肪细胞的结构和活性差异,但脂肪颗粒大小、脂肪成分、血管基质片段细胞（Stromal Vascular Fraction Cells,SVFs）的数量和活性、ADSCs的数量及功能等其他变量相同的脂肪颗粒。随后进行动物实验,分析不同脂肪颗粒动物体内移植后的体积保留、血管生成、脂肪存活等情况,探究脂肪细胞结构与活性对移植后脂肪存活的影响。最后,回顾性分析在脂肪移植手术全程中,尽可能保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在自体脂肪移植乳房整形手术中的临床效果,从临床角度出发,评价保护脂肪细胞结构与活性在大容量脂肪移植中的意义。研究目的1.体外构建脂肪细胞结构和活性差异,但其他变量相同的脂肪颗粒。2.研究不同脂肪颗粒裸鼠体内移植后的脂肪存活情况,评价脂肪细胞结构与活性对移植后脂肪存活的影响。3.评价保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在自体脂肪移植乳房整形手术中的临床效果。研究方法1.体外构建脂肪细胞结构和功能差异,但其他变量相同的脂肪颗粒采用脂肪抽吸术获取人脂肪颗粒（n=10）,分别用棉垫过滤法、轻柔离心法（400×g,1 min）及Coleman离心法（1200 × g,3 min）处理,所获得的脂肪样品均再次进行二次浓缩15分钟。对二次浓缩后的脂肪颗粒进行检测,评价仅有脂肪细胞结构和功能差异,但其他变量相同的脂肪颗粒是否构建成功:利用扫描电镜检测脂肪细胞的结构;利用葡萄糖转移实验比较脂肪细胞的活性;脂肪经胶原酶消化获得SVF细胞,利用Muse细胞仪检测SVF细胞的数量和活性;利用流式细胞分析仪测定其中的ADSCs的含量;利用CCK8（Cell Counting Kit8）试剂盒绘制ADSCs细胞增殖曲线,比较组间ADSCs的增殖能力;对ADSCs进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,比较各组脂肪干细胞的多向分化能力。2.比较不同脂肪颗粒裸鼠体内移植后脂肪存活效果使用免疫缺陷小鼠构建自体脂肪移植的动物模型,于注射后2周、8周取材。比较移植物的大体观、体积保留率。并利用HE染色、免疫组织化学染色（脂周蛋白、CD31、血管内皮生长因子）方法,分析脂肪细胞存活、有效体积保持率、血管密度、细胞因子分泌等,评估移植物成活的质量。3.评价保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在自体脂肪移植乳房整形手术中的临床效果。回顾性分析在脂肪移植手术全程中,尽可能保护脂肪细胞的结构与活性的手术方法,在乳房再造及假体取出即刻自体脂肪移植隆乳术中的临床效果。术后从并发症发生情况、乳房大小改变、患者满意度、第三方医生评价等方面进行手术效果评估,从临床角度出发,评价保护脂肪细胞结构与活性在大容量脂肪移植中的意义。研究结果1.第一部分不同脂肪纯化方法获取的脂肪,经二次浓缩15min处理后,组间脂肪细胞的结构与活性存在差异。而组间脂肪成分、SVF细胞数量及活性、ADSCs细胞数量与功能均无差异。说明成功构建了仅有脂肪细胞结构和活性差异,但其他变量相同的脂肪颗粒。2.第二部分（1）移植物体积保留率:移植后2周及8周取材,三组间体积保留率均无统计学差异（P>0.05）。（2）HE染色评分:脂肪细胞的结构和活性越好,移植后移植物的质量越好,表现为脂肪组织的完整性最好,空泡、坏死、纤维化和炎症程度最轻。反之,脂肪细胞的结构和活性越差,移植后移植物的质量也越差,表现为脂肪组织的完整性差,而空泡、坏死、纤维化和炎症程度重。（3）脂周蛋白免疫组织化学染色:脂肪细胞的结构和活性越好,移植后活脂肪细胞越多,有效体积保持率越高,组间具有统计学差异（P<0.05）。（4）血管计数（CD31+）:移植后2周及8周,均可发现脂肪细胞的结构和活性越好,移植物中新生血管越多,组间具有统计学差异（P<0.05）。（5）血管内皮生长因子分析:移植后2周,脂肪细胞的结构和活性越好,移植后新生血管越多,组间具有统计学差异（P<0.05）,血管内皮生长因子的变化与血管生成趋势相平行。3.第三部分（1）在自体脂肪移植乳房重建手术中,尽可能保护脂肪细胞的结构和活性,术后畸形得到很好纠正,患者满意度高,第三方医生评价好。与既往研究相比,所需手术次术少,并发症发生率低。（2）在假体取出即刻自体脂肪移植隆乳手术中,尽可能保护脂肪细胞的结构与活性,术后乳房外形自然、质地柔软,患者满意度高,第三方医生评价好。与既往研究相比,所需手术次术少,并发症发生率低。研究结论1.在第一部分的研究中,通过对不同脂肪纯化方法获取的脂肪,进行二次浓缩的方式,成功消除了组间脂肪成分、SVF细胞数量与活性、脂肪干细胞数量与功能等差异,同时保留了脂肪细胞结构与活性的差异,成功构建出仅有脂肪细胞结构和活性差异,但其他变量相同的脂肪颗粒,为进一步研究脂肪细胞结构和活性在脂肪移植中的作用创造了条件。2.脂肪细胞的结构和活性保护越好,移植物的质量越好。表现为脂肪组织的完整性高、活脂肪细胞多、新生血管多,而空泡、坏死、纤维化和炎症程度较轻。3.脂肪细胞的结构和活性保护越好,移植脂肪中功能性脂肪细胞越多,可分泌更多的促进血管生成的细胞因子,促进血管生成和移植脂肪成活。4.在脂肪移植乳房整形手术中,尽可能保护脂肪细胞的结构和活性,具有术后体积保持良好,所需手术次术少,并发症发生率低,患者满意度高,第三方医生评价好等优点。