枣(Ziziphus jujuba Mill.)是我国重要的特色和优势果树树种。枣疯病是由植原体(Phytoplasma)引起的致死性传染病害,对枣产业危害极大。本课题组最近在国内外首次选育出了高抗枣疯病新品种“星光”,为揭示其抗病机制,本研究利用双向电泳和质谱分析技术,对其在植原体侵染前后不同时期的蛋白进行了蛋白质组学分析,旨在寻找抗枣疯病相关蛋白,进而通过氨基酸序列预测基因序列,为抗病基因克隆奠定基础。主要结果如下:1建立了枣韧皮部蛋白的双向电泳体系本试验通过对TCA-丙酮法和甲醇/醋酸铵法的比较,确定甲醇/醋酸铵法适宜枣韧皮部总蛋白提取,可解决枣枝皮中多糖、色素等对双向电泳的干扰问题。适宜的蛋白上样量为380μL(约200 ug),最佳平衡时间为30min-40min,第二向SDS-PAGE电泳的最佳电泳值为200V;通过考马斯亮蓝和硝酸银染色方法的比较,确定了硝酸银染色适宜于枣韧皮部蛋白染色。确定了枣韧皮部蛋白主要集中在pI4～7之间。利用本试验建立的蛋白质提取及双向电泳体系,对枣韧皮部蛋白采用pH4～7的线性IPG胶条进行分离,经硝酸银染色后获得了重复性好、分辨率高的蛋白质双向电泳图谱,经PDQuest图像分析软件处理,得到500-700个可识别的蛋白质斑点。2枣疯病抗性相关蛋白分析通过单向电泳分析,发现在枣疯病病树上嫁接的“星光”接穗与健康树上相比,在70d、90d时没有明显差异,而在嫁接后110d时,有三条谱带(分子量为31.2 kDa、30.4 kDa、29.0 kDa)表达量显著增加。通过双向电泳和蛋白斑点比对分析,发现枣疯病病树上嫁接的“星光”接穗在嫁接后90d及110d时,在酸性端出现一随发育阶段后延而表达增强的区域(分子量27-32KD、等电点pI4.2～5.0),在对照健康树上嫁接的接穗均没有此变化。此结果与单向电泳结果一致。确定了与枣疯病抗性相关的蛋白范围为分子量27～32KD、等电点pI4.2～5.0。3获得了3个同源性较好的蛋白序列选取其中10个蛋白差异点进行了质谱分析,获得了3个同源性较好的蛋白点,分别为可溶性的NSF附着蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶和网格蛋白接合蛋白,另外7个为未知新蛋白。对鉴定出的蛋白进行了分析,探讨了可能的抗病机理,为进一步研究抗性蛋白的相关基因信息打下了良好的基础。