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目的:通过培养体外人口腔鳞癌KB多药耐药细胞系,建立裸鼠KB/ADM耐药移植瘤模型,检测移植瘤细胞多药耐药(MDR1)以及拓扑异构酶酶(TopoⅠ、Ⅱα、Ⅱβ)基因的表达,并探讨其在肿瘤多药耐药方面的意义。方法:1.不同浓度ADM、VCR、VP-16和HCPT处理KB亲本细胞以及KB/ADM耐药细胞后,MTT法测定其对肿瘤细胞的增值抑制率、IC50以及耐药倍数。2.以ADM为诱导,通过逐步增加剂量法,得到多药耐药细胞系KB/ADM。KB/ADM细胞1×1010/L,取0.2mL接种于裸鼠右侧颈部皮下建立移植瘤模型;随机分组:A.NS组:腹腔注射等体积生理盐水;B.NC组:腹腔注射 NC5mg/kg;C.VP-16 组:腹腔注射 5mg/kgVP-16;D.5μmol/L VRP 与 5mg/kgVP-16 组;E.5mg/kgNC 与 5mg/kgVP-16 组,观察肿瘤生长特征,给药期间每隔一天称重测量肿瘤最长径(a)和短径(b),计算肿瘤体积(V)。3.HE染色法观察病理形态学的改变;4.TUNEL法分析肿瘤细胞结构细胞凋亡的影响;5.实时荧光定量PCR检测不同给药组对MDR1,TopoⅠ、ⅡⅡα、ⅡβmRNA表达的影响;结果:1.不同浓度ADM、VCR、VP-16和HCPT对KB亲本细胞的IC50值分别为 65.77μg/mL,46.04μg/mL,38.73μg/mL 和 47.78μg/mL;对 KB/ADM耐药细胞的 IC50值分别为 159.91μg/mL,87.27μg/mL,78.46μg/mL,129.43μg/mL。亲本细胞KB细胞对四种抗癌药的敏感性明显高于耐药细胞KB/ADM;相对于KB细胞,KB/ADM的耐药倍数分别为2.43,1.90,2.03,2.71。2.至处死裸鼠之前均无死亡,在给药之前各组裸鼠瘤体体积无明显差异(P>0.05)。给药后各组裸鼠肿瘤的生长速度有明显差异(P<0.05)。3.1 HE染色结果可见阴性对照组(NS组)和依托泊苷组(VP-16组)的形态无明显改变,而氯化两面针碱组(NC组)组和依托泊苷与维拉帕米组(VRP+VP-16组)和氯化两面针碱与依托泊苷组(NC+VP-16组)细胞形态有明显改变。3.2 TUNEL染色细胞凋亡检测结果显示,VP-16组组织凋亡率为5.45%;而移植瘤裸鼠注射Smg·kg-1NC后,NC组移植瘤裸鼠的凋亡率为16.60%;植瘤裸鼠注射5μmol·L-1VRP与5mg·kg-1VP-16的凋亡率48.03%;5mg·kg-1NC与5mg·kg-1VP-16组,移植瘤裸鼠的凋亡率为60.13%。4.PT-PCR结果经分析可知,NC作用于口腔鳞癌KB/ADM移植瘤裸鼠后,与阴性对照组相比,MDR1,TopoⅠ、Ⅱα、ⅡβmRNA表达均下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功的建立了裸鼠KB/ADM耐药移植瘤模型,NC可明显加强依托泊苷诱导耐药细胞系凋亡,并且能抑制了 MDR1,TopoⅠ、Ⅱα、ⅡβmRNA基因的表达,NC可能逆转了肿瘤的多药耐药性,使移植瘤裸鼠的口腔鳞癌耐药细胞KB/ADM对VP-16的敏感性提高。