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目的：在单层培养及离心管成团培养体系中，观察一氧化氮(nitric oxide，NO)对家兔肋软骨生长板软骨细胞终末分化的影响，探讨分析NO在生长板软骨细胞终末分化中的作用。从而为软骨内成骨的机制及骨软骨发育异常性疾病的发病机理的阐明提供一定的理论依据。方法：(1)原代分离兔肋生长板软骨细胞，单层培养并稳定传代，将第二代生长板软骨细胞接种于24孔板中，待细胞生长达约80％融合时：a．向培养液中添加具有诱导软骨细胞终末分化作用的全反式维甲酸(all trans-retinoic acid，AT-RA)，其剂量浓度为0、35、100、350、1000、3500nmol／L，检测细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的活性及培养上清液中NO的浓度；b．向培养液中添加1μmol／L的AT-RA同时添加具有抑制NOS活性的L-硝基-精氨酸甲脂(N~G-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME)，L-NAME的浓度为0、1、2.5、5、10mmol／L，检测细胞内ALP活性；c．向培养液中添加0、100、1000nmol／L的AT-RA同时添加1mmol／L的可以提供NO的S-硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione，SNOG)，检测细胞内ALP活性。(2)离心管成团培养兔肋生长板软骨细胞，分三组：对照组，AT-RA组，AT-RA+L-NAME组。培养2周后，组织切片HE染色，观察软骨组织形态和亚细胞结构；免疫组化检测X型胶原、诱导型NOS(inducible nitric oxide synthase，iNOS)表达；半定量RT-PCR检测X型胶原、iNOS mRNA表达。结果：(1)单层培养条件下：随着AT-RA浓度的增加，ALP活性随之提高，与对照组相比有显著差异(P＜0.05)，当AT-RA浓度增加到1μmol／L时，显示一定的饱和效应；随着AT-RA浓度的提高，细胞内NOS活性明显增加(P＜0.05)，培养液中NO浓度也随之提高(P＜0.05)；添加L-NAME后，ALP的活性随L-NAME浓度的增加而下降(P＜0.05)；SNOG联合不同浓度的AT-RA与只添加相应浓度的AT-RA对照组相比，ALP的活性增加(P＜0.05)。(2)成团培养条件下：AT-RA组细胞肥大化较明显，免疫组化和半定量RT-PCR均显示X型胶原在AT-RA组表达最高，AT-RA+L-NAME组表达较少，对照组最少；iNOS表达在AT-RA组及AT-RA+L-NAME均较高，对照组iNOS表达较少。结论：(1) NO可以促进兔肋软骨生长板软骨细胞碱性磷酸酶活性的增加和X型胶原的表达，即可促进兔肋软骨生长板软骨细胞的终末分化。(2) NO是兔肋软骨生长板软骨细胞向成熟及肥大化表型分化的必需因素。