原因不明反复自然流产患者主动免疫治疗前后血清中IL-10、M-CSF、LIF浓度的变化

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目的:从免疫学的角度来看,妊娠是这样一个过程,即带有父方异体抗原的胚胎,对母体来说是一个移植物,母体免疫系统识别并产生保护性免疫应答,直至胎儿娩出。流产是母胎之间免疫平衡遭到破坏,发生免疫排斥,导致胎儿同种异体移植失败的结果。反复自然流产(recurrent spontaneousabortion,RSA)是妊娠期常见的并发症,发生率约占总妊娠数的 1%,占自然流产数的 15%。其病因涉及遗传、免疫、内分泌、感染及胚胎畸形等因素,除此之外,尚有 40-60%原因不明。近年来的研究表明,母胎界面上 LIF、M-CSF 和TH2 型细胞因子的缺乏与 RSA 关系密切,但尚未见血清中LIF、M-CSF 与 RSA 关系的报道。本研究旨在研究原因不明RSA 患者主动免疫治疗前后血清中 IL-10、M-CSF、LIF 浓度的变化,以期探讨 IL-10、M-CSF、LIF 在原因不明 RSA的发病及主动免疫治疗中的作用。 方法:资料来源:选自在河北医科大学第二医院妇产科门诊和计划生育实验室就诊患者。流产组: 20 例,为 RSA患者,自然流产次数≥3 次,排除染色体、解剖、内分泌异常、感染及自身免疫性疾病。所有病例均接受主动免疫治疗,在治疗前及 1 个疗程结束后 3 周分别抽取外周血。正常非孕组:20 例,为要求放置宫内节育器的正常非妊娠妇女,既往均有妊娠史但无自然流产史、死胎或死产史,也无上述疾病史。 1<WP=4>中 文 摘 要正常妊娠组: 20 例,为因孕 40-45d 要求人工流产妇女,既往无不良孕育史及上述疾病史,人流前无产兆。各组均抽取前臂肘静脉血 2ml,置于无菌不含抗凝剂的试管中,室温下待其自然凝固, 2000 转/分,离心 10 分钟,分离上层血清后,置-70℃冰箱待测。采用酶联免疫吸附法检测正常非妊娠妇女(正常非孕组)、正常妊娠妇女(正常妊娠组)和 RSA患者(流产组)淋巴细胞主动免疫治疗前后血清中 IL-10、M-CSF、LIF 的水平。具体步骤如下:⑴确定所需微孔板的孔数。⑵吸取标准品 A(0pg/ml) B(50pg/ml) C (100pg/ ml)D(250pg/ml)E(500pg/ml)F(1000pg/ml)各 100 微升至标准孔内,做双标准。⑶吸取 50 微升标本稀释液加至标本孔内。⑷吸取 50 微升标本加至标本孔内。⑸吸取 50 微升酶标抗体加至所有孔内。⑹用微量振荡器振荡 30 秒钟以充分混合。⑺在 37℃恒温箱中孵育 60 分钟。⑻通过洗板机用洗液将反应板洗涤 6 遍。⑼用反应板拍打吸水纸,以除去残留的水滴。⑽在所有孔内均加入 50 微升显色剂 A 和 50 微升显色剂 B。⑾再次放入 37℃恒温箱孵育 15 分钟。⑿所有孔内均加入 50微升终止液终止反应。⒀反应 30 秒钟。⒁保证所有孔内溶液均由兰色变为黄色。⒂由酶标仪在 450nm 处读出吸光度,酶标仪可自动转换数据。 结果:1. 流产组治疗前血清 IL-10、M-CSF 的水平分别为(0.19±0.048)pg/ml、(100.99±8.32)pg/ml,明显低于正常非孕组的(0.24±0.026)pg/ml、(110.97±11.82)pg/ml(P<0.01);LIF 的水平为(109.99±8.55)pg/ml 与正常非孕组的(108.47±6.66)pg/ml 比较,差异无显著性 (P>0.05)。2.流产组治疗后血清 IL-10[(0.23±0.023)pg/ml]、M-CSF 2<WP=5>中 文 摘 要[(110.37±7.88)pg/ml]水平,较治疗前明显升高 (P<0.01);LIF[(111.25±8.96)pg/ml]水平与治疗前比较,差异无显著性 (P>0.05)。3. 流产组治疗后上述三种细胞因子的水平与正常非孕组比较,差异均无显著性 (P>0.05)。4. 正常妊娠组IL-10 (0.27±0.028)pg/ml] 、M-CSF (120.34±11.37)pg/ml]、 [ [LIF[(118.38±9.58)pg/ml] 水平较正常非孕组明显升高(P<0.01,P<0.05, P<0.01)。 结论:1. 原因不明 RSA 患者体内 IL-10、M-CSF 表达下调,与正常非孕组比较差异有显著性(P<0.01),提示血清中 IL-10、M-CSF 水平降低与 RSA 的发生密切相关。2. 正常妊娠时血清中 IL-10、M-CSF、LIF 的水平均上升,与怀孕前比较差异有显著性(P<0.01,P<0.05, P<0.01),这可能提示 IL-10、M-CSF、LIF 均为对妊娠有利的细胞因子。 3. RSA患者经主动免疫治疗后 IL-10、M-CSF 水平明显升高,与主动免疫治疗前比较差异有显著性(P<0.01),且主动免疫治疗后妊娠获得成功的患者, IL-10 和 M-CSF 表达大多明显升高,提示主动免疫治疗有助于提高 IL-10、M-CSF 这些对妊娠有利的细胞因子的水平,有助于 RSA 患者妊娠成功。4. 本研究未发现 RSA 患者血清中 LIF 水平降低,且经主动免疫治疗后 LIF 水平无明显变化。总之,原因不明 RSA 和血清中IL-10、M-CSF 水平降低有关,主动免疫治疗可上调 IL-10、M-CSF 水平,IL-10、M-CSF 对妊娠的维持可能起重要作用,因此,检测 IL-10、M-CSF 可作为流产信号指标。
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