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目的:宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一,严重威胁着女性的健康。本文主要探讨TopoIIα与宫颈癌治疗的关系、ATRA对人宫颈癌HeLa细胞中TopoIIα的调节机制以及TopoIIα的改变对HeLa细胞分化和耐药性的影响。方法:收集宫颈癌患者病变组织,运用免疫组化比较化疗前后组织中TopoIIα的水平变化。在人宫颈癌HeLa细胞中,通过western blot检测不同剂量ATRA处理后,内源性和外源性TopoIIα蛋白水平;用RT-PCR检测ATRA对TopoIIαmRNA水平的影响;用蛋白质合成抑制剂CHX处理,观察ATRA对蛋白周转率的影响;用蛋白酶体抑制剂MG-132和溶酶体抑制剂Leupeptin处理后观察TopoIIα蛋白水平的变化;用免疫共沉淀和western blot分别检测泛素和类泛素是否参与TopoIIα的蛋白质修饰;瞬时转染或小RNA干扰使细胞中TopoIIα过量表达或低量表达后,用NBT实验检测细胞分化水平,western blot检测cyclinD1表达水平;细胞免疫荧光检测TopoIIα的细胞定位;用western blot比较ATRA和TopoIIα抑制剂etoposide对多药耐药蛋白P-gp表达的影响。结果:1. TopoIIα是宫颈癌治疗的靶点免疫组化实验显示:与正常组织相比,化疗前组宫颈癌组织中TopoIIα高表达,化疗后的病变组织中TopoIIα水平显著下降。2.在人宫颈癌细胞HeLa中,ATRA能促进TopoIIα的降解ATRA促进内源TopoIIα和外源Flag-TopoIIα水平降低,呈剂量依赖性。3. ATRA在翻译后水平调节TopoIIα的表达RT-PCR结果显示ATRA不影响TopoIIαmRNA水平。当用CHX处理后,ATRA导致TopoIIα下降速率加快,这些提示ATRA在翻译后水平调节TopoIIα水平。4.蛋白酶体途径参与到ATRA介导的TopoIIα的降解中溶酶体抑制剂Leupeptin并不能阻断ATRA介导的TopoIIα降解;而蛋白酶体抑制剂MG-132能逆转ATRA介导的内源性和外源性TopoIIα的降解。免疫共沉淀试验检测到Ub-TopoIIα的复合体;Western blot结果提示了ISG15与TopoIIα结合的可能。5. TopoIIα水平的改变对细胞分化与增殖的影响NBT实验结果显示,与对照组相比,ATRA能诱导超过20%细胞分化,TopoIIα高表达诱导细胞去分化。ATRA能逆转由于TopoIIα的过表达而引起的去分化。当用siRNA干扰后,细胞分化率达到20%以上。过量表达TopoIIα能促进cyclinD1表达,干扰TopoIIα的表达能降低cyclinD1的表达水平。6. ATRA对TopoIIα细胞定位和耐药性的影响细胞免疫荧光显示荧光标记的TopoIIα水平改变主要发生在细胞核内,细胞质内的荧光强度几乎不变。与TopoIIα抑制剂etoposide相比,ATRA能降低耐药蛋白P-gp的表达。结论:TopoIIα是宫颈癌诊断和治疗的一个靶点。ATRA在翻译后水平调节TopoIIα的表达。泛素-蛋白酶体参与到TopoIIα的降解过程中。我们发现类泛素ISG15修饰系统可能影响TopoIIα蛋白修饰。本研究首次提出TopoIIα与细胞分化有关。另外,ATRA主要在细胞核内促进TopoIIα的降解,下调P-gp的蛋白水平。这些结果表明ATRA可能是宫颈癌治疗新的候选药物。目的:探讨调节褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0μg/ml、10μg/ml、100μg/ml和500μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和TopoIIα表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100μg/ml和500μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。