MARCH（Membrane-associated RING-CH）蛋白即膜相关的 RING-CH 家族蛋白,属于E3泛素连接酶家族,该家族成员分布广泛,参与多种细胞功能,如免疫调节,内质网相关蛋白降解,胞内蛋白质运输,线粒体动力学平衡和精子发生调控等。目前,哺乳类中已经鉴定出1 1个E3泛素连接酶MARCH家族成员。然而在非哺乳类中,特别是在硬骨鱼中,MARCH蛋白的功能研究十分有限。本篇论文初步研究了march5a和march5b基因在斑马鱼中的表达特征及其对胚胎发育的影响。取得的主要结果如下:1、通过NCBI查找发现在斑马鱼中存在两个march5的同源基因,即march5a（Gene ID:561952）和march5b（Gene ID:326067）,二者的开放阅读框分别为 846 bp和870 bp,并分别编码281个和289个氨基酸。march5a基因包含了 6个外显子和5个内含子,march5b基因包含了 7个外显子和6个内含子。蛋白结构预测分析发现,斑马鱼March5a和March5b分别包含4个和2个跨膜结构域（TM）,且均含有一个MARCH家族的保守结构域,即N端的环指结构域,又称为RING结构域。对两基因所编码氨基酸进行同源序列比对,发现斑马鱼March5a和March5b的一致性为68.5%。斑马鱼March5a与青鳉March5a及人、小鼠、鸡和非洲爪蟾的MARCH5氨基酸序列一致性分别为97.2%、96%、96%、94.7%和94%。斑马鱼中March5b与青鳉March5b及人、小鼠、鸡和非洲爪蟾的MARCH5氨基酸序列一致性分别为68.8%、67.8%、67.8%、67.8%和66.5%,表明斑马鱼March5a在进化过程中保守性高于 March5b。2、通过RT-PCR检测march5a和march5b在斑马鱼成鱼各组织及早期胚胎不同发育时期中的表达情况,结果显示两基因在成鱼不同组织及胚胎各时期中均普遍表达,但表达量存在差异;同时在未受精的卵细胞中也检测到两基因的表达,表明二者均为母源基因。利用胚胎整体原位杂交（Whole-mount in situ hybridization）技术检测march5a和march5b的表达情况,结果显示胚胎发育的早期阶段两基因在全身均表达,随着胚胎发育的进行信号集中于头部高表达。3、低氧（1%O2）处理斑马鱼胚胎成纤维细胞（ZF4细胞）6h、24h和48h,然后利用QPCR检测细胞中march5a和march5b的表达情况,结果显示两基因均可响应低氧胁迫。4、合成march5a和march5b基因的MO,通过显微注射对斑马鱼胚胎进行基因敲降,发现注射march5a MO 48 h后,斑马鱼胚胎表现出心包膜水肿、尾部肿大弯曲等异常表型。对表型异常的胚胎进行取样,分别进行心脏、体节组织特异性标记基因（cmlcl、myod1）的胚胎整体原位杂交,结果显示march5a敲降对斑马鱼心脏和体轴的正常发育均具有显著影响,而march5b敲降对斑马鱼胚胎早期发育没有显著影响。通过以上的初步研究,期望能为进一步深入探究march5a和march5b两基因在早期胚胎发育中的功能提供一定的参考。