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目的：1.研究在短暂性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型中,自噬对其神经功能损伤的影响。2.研究自噬诱导剂及抑制剂预干预在不同时间点对实验大鼠脑细胞自噬及神经功能的影响。3.探讨蛭龙活血通瘀胶囊预干预对实验大鼠脑细胞自噬及神经功能的影响。方法：1.分组方法：将120只体重在250克到350克之间的4周到8周大小的青壮年雄性SD大鼠,随机分为a、b、c、d、e五个组。其中a组为假手术组(Sham),b组为短暂性局灶性脑缺血再灌注损伤模型组(MCAO,简称模型组),c组为造模前蛭龙活血通瘀胶囊干预组(蛭龙活血通瘀胶囊+MCAO,简称蛭龙组),d组为造模前雷帕霉素干预组(Rapamycin+MCAO,简称雷帕组),e组为造模前3-MA(3-甲基腺嘌呤)干预组(3-MA+MCAO,简称3-MA组)。2.给药方式：蛭龙组给予蛭龙活血通瘀胶囊灌胃半月,模型组给予和蛭龙组同体积的蒸馏水灌胃半月,雷帕组给予同体积的蒸馏水灌胃半月,并于造模前1小时给予侧脑室注射雷帕霉素,3-MA组同样给予同体积的蒸馏水灌胃半月,并于造模前1小时给予侧脑室注射3-MA。3.检测指标：①各组分别于短暂性局灶性脑缺血2小时以及再灌注后3小时和12小时三个时间点,进行神经功能评分,用TTC染色观察脑梗塞面积以推算脑梗塞体积比。②各组分别于再灌注后3小时和12小时这两个时间点取材,用电镜观察自噬体及自噬溶酶体情况,用免疫印迹法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况,用免疫组化观察自噬相关蛋白Beclin1阳性表达的情况。结果：1.采用Garcia JH大鼠神经功能评分标准进行神经功能评分。与假手术组比较,模型组、蛭龙组、雷帕组及3-MA组大鼠的神经功能评分在各实验观察时间点都显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组比较,蛭龙组和雷帕组实验大鼠的神经功能评分在三个时间点均较高,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05),而3-MA组实验大鼠在三个时间点的神经功能评分则都有所下降,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；而与蛭龙组相比较,雷帕组大鼠在各时间点的神经功能评分都略偏高,但差异不显著(P>0.05),3-MA组大鼠在各时间点的神经功能评分则显著减低,差异均有统计学意义(P<0.01)2.TTC染色推算脑梗塞体积比。与假手术组比较,模型组、蛭龙组、雷帕组及3-MA组在短暂性局灶性脑缺血2小时、再灌注3小时和12小时三个时间点实验大鼠的脑梗塞体积比均显著增高,差异有统计学意义(p<0.01)；与模型组比较,蛭龙组及雷帕组大鼠的脑梗塞体积比均明显降低,差异有统计学意义(p<0.01),而3-MA组大鼠的脑梗塞体积比则较高,差异有统计学意义(P<0.05)；与蛭龙组比较,雷帕组大鼠脑梗塞体积比在三个时间点均偏低,但差异不明显(P>0.05),3-MA组大鼠脑梗塞体积比则明显升高,差异有统计学意义(p<0.01)。3.电镜观察自噬小体和自噬溶酶体情况。在假手术组中,神经元的形态结构正常,这些神经元内可见健康的细胞核、线粒体和丰富的内质网,少数溶酶体结构；在模型组中可见神经元中有空泡,线粒体明显肿胀并有空泡形成；而在蛭龙3h组和雷帕3h组均可见内含细胞器的双膜结构自噬体,雷帕组略多见。此外,在蛭龙组与雷帕组中均可见微肿的线粒体和囊腔略有扩大的内质网,而在3-MA组可见神经元细胞核形态不规则,线粒体水肿,内质网略显水肿,个别细胞、细胞器固缩.4.免疫印迹法和免疫组化法检测自噬相关蛋白的表达。与假手术组比较,模型组、蛭龙组和雷帕组大鼠在缺血再灌注后3小时和12小时两个时间点的自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin1的表达都显著上调(p<0.01),而3-MA组与其差异不明显(P>0.05)；与模型组比较,蛭龙组和雷帕组的LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),而3-MA组LC3-Ⅱ和Beclinl蛋白的表达则弱些,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；与蛭龙组比较,雷帕组中这两种蛋白的表达均相当,差异不明显(P>0.05)。结论：1.采用改良线栓法建立短暂性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,可明显缩短手术时间、提高造模成功率和稳定性。2.本研究表明在短暂的局灶性脑缺血再灌注损伤中,自噬被轻度激活,对受损神经元有保护作用3.蛭龙活血通瘀胶囊预处理,同样减轻了脑缺血再灌注损伤,降低了实验大鼠的脑梗塞体积比,相对增加了实验大鼠神经功能评分,显著增加了短暂性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑缺血半暗带皮质区自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Becline1的表达,并在缺血再灌注3小时时电镜检测到了自噬体,这与雷帕霉素预处理效果相似。4.在实验大鼠短暂性局灶性脑缺血2小时再灌注的12小时内,自噬的活化程度与脑梗塞体积比呈负相关,与神经功能评分呈正相关。这些结果在表明,自噬活化是脑缺血再灌注大鼠脑神经保护作用的基础,而蛭龙活血通瘀胶囊预处理在一定程度上正是通过这个机制实现对实验大鼠的脑神经保护作用来提高其对短暂性局灶性脑缺血再灌注损伤耐受的。