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目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)通过微管蛋白乙酰转移酶(αtubulin acetyltransferase,α-TAT1),调节成纤维细胞转分化和凋亡的作用及其机制。方法采用HPOE-ED8050动式染尘控制系统构建矽肺大鼠模型,Wistar大鼠于华北理工大学动物中心屏障实验室饲养。实验分组:(1)矽肺模型对照组(腹腔内埋入含2ml生理盐水的微量缓释胶囊,至24周处理)、(2)矽肺模型24周组(腹腔内埋入含2ml生理盐水的微量缓释胶囊,动式染尘3h/d,至24周处理)、(3)AcSDKP干预处理组(腹腔内埋入含2ml生理盐水的微量缓释胶囊,动式染尘3h/d,染尘12周后更换为含Ac-SDKP的微量缓释胶囊,至24周处理)。贴壁法原代培养Wistar大鼠肺成纤维细胞,分别在不同时间点(0、6 h、12 h、24 h、48 h),应用TGF-β和Ac-SDKP作用于肺成纤维细胞。构建α-TAT1过表达和沉默表达的肺成纤维细胞,将其分组为:(1)对照组(Sham)、(2)TGF-β诱导组(TGF-β)、(3)Ac-SDKP处理组(TGF-β+Ac-SDKP)、(4)α-TAT1过表达组(α-TAT1-pc DNA)、(5)α-TAT1过表达+TGF-β诱导组(α-TAT1-pc DNA+TGF-β)、(6)α-TAT1沉默处理组(α-TAT1-si RNA+TGF-β+Ac-SDKP)。HE染色、天狼星红染色检测胶原沉积;免疫组织化学检测α-TAT1定位表达;Western blot法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Type I Collagen,Col I)、乙酰化微管蛋白α(acetylatedα-tubulin,Ac-Tubα)、Caspase-3、α-TAT1、Bcl-2、Bax表达水平。结果1动物模型实验:(1)HE染色在模型组中可见典型的纤维性结节,AcSDKP处理组矽结节数量和面积较模型组明显降低,天狼星红染色在矽肺模型组中可见胶原大量沉积。Ac-SDKP处理组胶原沉积减少。(2)Western blot结果显示,矽肺模型组Col I、α-SMA表达量分别是对照组的3.97倍、2.72倍,AcSDKP处理后,Col I、α-SMA表达量下降,分别为矽肺模型组的41.9%、47.1%。(3)免疫组织化学染色结果显示,α-TAT1可强表达于支气管纤毛、肺泡II型上皮、成纤维细胞中;在矽肺模型组由间质细胞和肌成纤维样细胞构成的结节中发现α-TAT1表达缺失,而Ac-SDKP处理组发现阳性表达较矽肺模型组增加。(4)Western blot结果:Ac-Tubα、α-TAT1蛋白表达与免疫组织化学染色结果相一致。2细胞培养实验:(1)Western blot结果显示,给予不同时间点TGF-β刺激成纤维细胞,随着时间延长肺成纤维细胞α-TAT1表达下调,α-SMA表达上调。而Caspase-3凋亡蛋白表达在12h表达量最高而后逐渐降低;Ac-SDKP不同时间点作用于肺成纤维细胞发现其可以上调α-TAT1表达,从而提高微管蛋白的乙酰化水平,维持微管蛋白骨架的稳定;(2)Western blot结果显示,对肺成纤维细胞进行靶向质粒载体的转染,从而对α-TAT1过表达和沉默表达质粒载体的构建和进行筛选。(3)Western blot结果显示:当α-TAT1过表达质粒转染肺成纤维细胞(α-TAT1pc DNA)后,与对照组比较,Col I、α-SMA和Caspase-3蛋白表达均无明显差异。而TGF-β诱导α-TAT1过表达质粒转染的肺成纤维细胞(TGF-β+α-TAT1pc DNA)时,与没有转染质粒载体细胞的TGF-β诱导组(TGF-β)相比较,Col I、α-SMA蛋白表达分别下调,Caspase-3蛋白表达上调。(4)Western blot结果显示:TGF-β组与对照组相比I型胶原、ɑ-SMA、Bcl-2表达分别上调了4.56倍、1.99倍、2.11倍;Caspase-3、Bax蛋白表达下调,分别为对照组的35.53%、44.14%。而给予Ac-SDKP处理之后发现I型胶原、ɑ-SMA、Bcl-2蛋白表达下调了45.22%、34.50%、30.47%;Caspase-3、Bax蛋白表达较TGF-β组提高。将α-TAT1沉默后发现经Ac-SDKP不能降低TGF-β诱导的I型胶原、ɑ-SMA、Bcl-2表达;并且提高TGF-β诱导的Caspase-3、Bax表达。结论Ac-SDKP能够通过α-TAT1表达,调控微管蛋白乙酰化水平,调节TGF-β1介导的肌成纤维细胞分化和细胞凋亡抵抗,进而发挥其抗矽肺纤维化的作用。