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背景:获得性骨髓衰竭性疾病(acquired bone marrow failure syndromes,aBMFS)是由于造血干/组细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)数量及质量缺陷而引起的一组异质性造血系统疾病,其主要表现为骨髓衰竭及外周血细胞减少。再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA),阵发性睡眠性血红蛋白尿征(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)、骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS),此三种疾病是临床中最为常见的aBMFS,骨髓衰竭为该组疾病的共同特征,但每一种疾病在临床表现及治疗决策方面均有其独特性。除此之外,此三种疾病均可以进一步发生克隆性演变,并有不同程度转变为其他恶性疾病的风险。因而,该类疾病的鉴别诊断为临床工作的重点和难点问题。Wilms肿瘤基因1(Wilms tumor gene 1,WT1)位于染色体11p13区域并在Wilms瘤的发生过程中发挥重要作用,亦有研究表明,WT1在非成熟细胞,尤其是CD34+ HSPCs的生长分化中起决定性作用。目前,越来越多的研究表明,WT1可以作为监测血液系统恶性克隆性疾病的微小残留病(minimal residual disease,MRD)的标志物,但其在aBMFS中的作用尚未明确。目的:本研究目的在于检测WT1基因在AA,PNH及MDS患者中的表达水平,以期揭示WT1在aBMFS中的意义,为aBMFS的鉴别诊断、疗效、疾病预后的评估提供新策略。方法:(1)回顾分析了 387例aBMFS患者,其中包括初诊AA(76例)、PNH(20例)以及MDS(84例)患者,确诊AA并接受免疫抑制剂治疗(immunosuppressive therapy,IST)至少2年的患者共189例,其余为AA治疗后发生疾病演变并转化为MDS或急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的患者共18例。(2)以ABL管家基因作为内参对照,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测患者骨髓单个核细胞 WT1 基因的表达;(3)应用Mann-Whitney U检验和秩和检验进行组间WT1表达水平的比较,应用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估WT1在疾病鉴别诊断及发生演变等诊断性试验中的应用价值和效能。结果:(1)初治患者中,AA骨髓中WT1表达水平均显著低于PNH(p=0.023)及MDS患者(p<0.001);(2)MDS患者中,骨髓中WT1表达水平随着疾病危险评分的增高而升高;(3)低增生MDS患者与非重型AA(non-severe AA,NSAA)患者的骨髓WT1表达水平差异显著(p<0.001);(4)AA患者经治疗后取得部分反应(partial response,PR)及完全反应(complete response,CR)者,其骨髓 WT1 表达水平均显著高于初治状态(p=0.017;p=0.003),而治疗后无反应(no response,NR)者与初诊状态无明显差异。(5)AA患者经治疗后发生疾病演变者,WT1水平亦显著升高。结论:AA,PNH,MDS患者的骨髓单个核细胞WT1表达水平差异显著;WT1在危险度评分不同组别的MDS患者中表达水平差异明显;WT1在AA患者中的表达随着疾病状态不同而动态波动。因而,WT1可以作为aBMFS的鉴别诊断及疗效、预后的评估的可靠指标。背景:获得性再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)是一种骨髓造血衰竭性疾病,目前认为,免疫异常为AA发病的关键要素,尤其是自身反应性T淋巴细胞介导造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs)数量及质量的缺陷是其病理生理的重要环节。自噬为细胞在一定条件下如自身生存压力、低氧、能量匮乏时进行的一种高度保守的自我消化的过程,自噬活动与T细胞的病理生理作用及HSPCs密切相关,自噬相关基因5(autophagy-relatedgene5,ATG5)在自噬活动中发挥不可或缺的作用。比较遗憾的是,ATG5在AA的发病机制中的作用尚未阐明。目的:本研究目的在于探讨ATG5基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与AA的关联;探索ATG5基因的6个多态性位点(rs3761796,rs473543,rs510432,rs28656919,rs573775 及 rs803360)与中国汉族人群 AA 易感性、疾病严重程度、疾病预后结局的相关性。方法:按照入院顺序连续性收集AA患者共176例,同时随机选取157例年龄、性别匹配的健康志愿者作为对照。取AA患者及对照组外周静脉血5ml,提取基因组DNA,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/MS)分析平台进行多态性分型。应用 SPSS(Statistical Product and Service Solutions)软件统计 ATG5基因各多态性位点的基因型在所有研究对象中的表达频率,对AA患者与对照、非重型AA(non-severe AA,NSAA)与重型AA(severe AA,SAA)间的基因型差异进行比较,分析AA患者患病率及疾病严重程度与ATG5基因多态性(rs3761796,rs473543,rs510432,rs28656919,rs573775 及 rs803360)的关系。此外,比较出现新发血液学事件的AA患者与未出现者其ATG5多态性的差异,分析AA患者在病程中出现新发血液学事件与ATG5多态性的关联。结果:(1)对照组ATG5基因的6个多态性位点基因型均符合哈-温(Hardy-Weinberg,H-W)平衡。(2)ATG5基因多态性与AA易感性关联分析显示:位点rs510432与rs803360在隐性模型下,AA的易感性明显降低(校准后比值比(odds ratio,OR),95%可信区间(confidence interval,CI)分别为 0.467[0.236-0.924],p=0.029,0.499[0.255-0.975],p=0.042)。(3)NSAA 与健康对照相比,位点 rs510432,rs803360 及rs473543 在隐性模型下,NSAA 的患病风险降低(rs510432:0.356[0.141-0.901],p=0.029;rs803360:0.348[0.138-0.878],p=0.025;rs473543:0.352[0.139-0.891],p=0.027)。(4)ATG5多态性位点rs573775与AA患者出现新发血液学事件明显相关,GG/AG/AA此3种基因型携带者出现新发血液学事件的累积风险各不相同且差异显著(p=0.007);另外,与rs573775位点非AA基因型(GG/AG)相比,AA基因型携带者出现新发血液学事件的累积风险更高(p=0.018)。结论:应用MALDI-TOF/MS分析平台对我国AA患者及健康对照ATG5基因多态性位点分析比较可见,在中国汉族人群中,ATG5多态性位点rs510432与rs803360在隐性模型下是AA的保护性因素;位点rs510432,rs803360及rs473543在隐性模型下是NSAA的保护性因素。位点rs573775与AA患者新发血液学事件相关,该位点AA基因型携带者更易出现新发血液学事件,因而需要选择更积极的治疗策略。