论文部分内容阅读
目的:探讨组蛋白乙酰化酶（histone acetyltransferases,HATs）抑制剂漆树酸（anacardic acid,AA）改善胸主动脉缩窄术（Thoracic aortic constriction,TAC）致小鼠心肌纤维化的组蛋白乙酰化酶KAT8（K（Lysine）acetyltransferase 8,KAT8）介导的H4K16ac乙酰化的修饰情况,以及小鼠心肌纤维化过程中纤维化相关蛋白的表达水平。方法:选择6-8周SPF级昆明小鼠为研究对象,按照乱数表法将实验动物进行分组:正常（Normal）组、假手术（Sham）组、胸主动脉缩窄（TAC）组、胸主动脉缩窄术后溶剂对照组（TAC+Veh）组、胸主动脉缩窄+漆树酸（TAC+AA）组小鼠。TAC组采取横向主动脉缩窄（TAC）手术以构建压力过载诱导的心肌纤维化模型。Sham组对小鼠胸主动脉只分离,不结扎。TAC+AA组在TAC术后1周开始给予腹腔注射AA（5 mg/kg,,3次/周）,持续至术后12周。TAC+Veh组在TAC术后腹腔注射同AA等剂量和等次数的DMSO至术后12周。在术后12周取材小鼠心脏组织进行以下实验:（1）超声多普勒评估手术效果,观察结扎部位情况、检测主动脉直径及血流流速;（2）马松染色（Masson’s trichrome,Masson）观察心脏形态与心肌组织的纤维化情况;（3）Western blot（WB）检测KAT8、H4K16ac、TGF-β1、SMAD3、Collagen I、CollagenⅢ蛋白表达情况;（4）免疫共沉淀检测KAT8与H4K16ac的相互作用关系。结果:（1）超声心动图表明,TAC组小鼠无名、左颈动脉和主动脉之间结扎部位出现狭窄。同时经测量TAC组主动脉弓结扎处的直径较Sham组明显减小（P＜0.05）,TAC组血流速度较Sham组显著增快（P＜0.05）。（2）Masson染色结果表明,TAC组小鼠心脏较Sham组增大,心肌组织中胶原增多,纤维化增加,而TAC+AA组较TAC组小鼠心脏减小,心肌组织中胶原减少,纤维化减轻。而Sham组与Normal组相比、TAC组与TAC+Veh组相比上述指标无明显变化。（3）WB结果发现,TAC组的组蛋白乙酰化酶KAT8及H4K16ac乙酰化的蛋白表达水平较Sham组显著升高（P＜0.05）,且TGF-β1、SMAD3、Collagen I、CollagenⅢ的蛋白表达水平较Sham组显著升高（P＜0.05）。而与TAC组比较,AA降低了TAC小鼠心脏中KAT8的蛋白过表达及H4K16ac的高乙酰化（P＜0.05）。同时,TAC+AA组中TGF-β1、SMAD3、Collagen I、CollagenⅢ的蛋白表达较TAC组下降（P＜0.05）。而Sham组与Normal组相比、TAC+Veh组相比上述指标无统计学差异（P＞0.05）。（4）免疫共沉淀结果显示,组蛋白乙酰化酶KAT8可以与H4K16ac相互结合。结论:（1）KAT8介导的组蛋白H4K16ac高乙酰化可能通过调控TGF-β1/SMAD3信号通路参与TAC小鼠心肌纤维化。（2）AA可能通过抑制KAT8介导的组蛋白H4K16ac高乙酰化影响TGF-β1/SMAD3信号通路进而改善TAC小鼠心肌纤维化。目的:探讨通过AA对组蛋白乙酰化的调控作用改善TAC致小鼠心肌收缩功能障碍及对TAC小鼠生存率的影响。方法:选择6-8周SPF级昆明小鼠为研究对象,按照乱数表法将实验动物进行分组:正常（Normal）组、假手术（Sham）组、胸主动脉缩窄（TAC）组、胸主动脉缩窄术后溶剂对照组（TAC+Veh）组、胸主动脉缩窄+漆树酸（TAC+AA）组小鼠。TAC组采取横向主动脉缩窄（TAC）手术以构建压力过载诱导的心肌纤维化模型。Sham组对小鼠胸主动脉只分离,不结扎。TAC+AA组在TAC术后1周开始给予腹腔注射AA（5 mg/kg,3次/周）,持续至术后12周。TAC+Veh组在TAC术后腹腔注射同AA等剂量和等次数的DMSO至术后12周。在术后12周取材小鼠心脏组织进行以下实验:（1）小鼠心脏超声检测小鼠心脏心室壁的厚度与左心室腔的大小,采用M型胸骨旁短轴视图测量三个心动周期的左心室收缩的相关指标。（2）Western blot检测心肌组织中核心转录因子GATA4及心脏收缩舒张的相关调节蛋白c Tn I、β-MHC蛋白表达情况。（3）Co IP检测H4K16与GATA4的相互作用关系。（4）观察各组小鼠生存率。结果:（1）心脏彩色超声结果表明,TAC组小鼠舒张期左室后壁及收缩期前壁后壁厚度较Sham组均明显变薄,左室容积明显增加（P＜0.05）,而经AA干预后舒张期左室后壁及收缩期前壁厚度较TAC组增厚,左室容积下降（P＜0.05）。术后TAC小鼠LVEF较Sham组显著下降（P＜0.05）,AA干预组小鼠的LVEF较TAC组升高（P＜0.05）。而在Sham组与Normal组相比、TAC组与Vehicle组相比时,这些指标无统计学差异（P＞0.05）。（2）WB结果发现,GATA4、cTNI、β-MHC的蛋白表达较Sham组升高（P＜0.05）。而与TAC组比较,在TAC+AA组中GATA4、c TNI、β-MHC的蛋白表达较TAC组下降（P＜0.05）。而在Sham组与Normal组相比、TAC组与Vehicle组相比时,这些指标无统计学差异（P＞0.05）。（3）CoIP结果显示,H4K16可以与GATA4相互结合。（4）TAC小鼠在漆树酸的干预下,生存率得到明显提高。结论:（1）AA能够通过抑制KAT8介导的组蛋白H4K16ac高乙酰化来影响小鼠心肌组织中核心转录因子GATA4及心脏收缩的相关调节基因c TNI、β-MHC的表达进而改善TAC小鼠的心脏结构和心功能。（2）AA可能通过调控KAT8介导的H4K16ac乙酰化修饰改善TAC小鼠生存率。