【摘 要】
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磷酸三(2-丁氧基)乙酯(Tris(2-butoxyethyl)phosphate,TBOEP)是一种常见的有机磷阻燃剂,在自然环境和水生动物中的检出率较高。尽管已有研究报道了TBOEP对斑马鱼胚胎的急性发育毒性效应,然而其致毒机理尚不明确。因此,本研究旨在探讨其可能的致毒机制。本实验以斑马鱼胚胎为模型,选取2 hpf的斑马鱼胚胎暴露于0、20μg/L、200μg/L、1000μg/L和2000μ
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磷酸三(2-丁氧基)乙酯(Tris(2-butoxyethyl)phosphate,TBOEP)是一种常见的有机磷阻燃剂,在自然环境和水生动物中的检出率较高。尽管已有研究报道了TBOEP对斑马鱼胚胎的急性发育毒性效应,然而其致毒机理尚不明确。因此,本研究旨在探讨其可能的致毒机制。本实验以斑马鱼胚胎为模型,选取2 hpf的斑马鱼胚胎暴露于0、20μg/L、200μg/L、1000μg/L和2000μg/L的TBOEP中直到120 hpf,观察统计其生长终点指标,评估TBOEP的急性发育毒性;在12 hpf、24 hpf、72 hpf和120 hpf四个时间点分别取样,检测发育相关基因的表达;在72 hpf和120 hpf进行凋亡染色;在暴露终点120 hpf进行生物化学分析,评价其损伤机制,探究潜在致毒机理。具体结果如下:1.TBOEP可以诱导急性发育毒性,抑制生长发育。具体表现为在2000μg/L暴露组斑马鱼胚胎的存活率和孵化率(分别为81.5±0.8%和75.8±1.2%)相比对照组(分别为91.1±0.3%和83.2±1.3%)显著下降;畸形率(8.1±0.4%)相比对照组(2.3±0.6%)显著上升。12 hpf,1000μg/L和2000μg/L浓度组的斑马鱼胚胎外包长度(分别为1.64±0.05 mm和1.59±0.06 mm)相比对照组(1.72±0.06 mm)显著减小;72 hpf,200μg/L、1000μg/L和2000μg/L浓度组的斑马鱼仔鱼体长(分别为3.32±0.03 mm、3.25±0.05 mm和3.15±0.04 mm)相比对照组(3.44±0.07 mm)均显著减少;120 hpf,200μg/L、1000μg/L和2000μg/L浓度组的斑马鱼仔鱼体长(分别为3.87±0.13 mm、3.79±0.13 mm和3.70±0.09 mm)相比对照组(4.04±0.11 mm)同样显著减少。2.TBOEP可以导致心脏发育毒性,诱导细胞凋亡,损害心脏发育。具体表现为72 hpf,在1000和2000μg/L浓度组斑马鱼仔鱼心率(分别为148±4.3次/min和142±5.1次/min)相比对照组(163.4±6.2次/min)显著下降。AO染色结果显示72hpf和120 hpf斑马鱼心脏区域有凋亡产生;TUNEL染色分析同样检测到在120 hpf斑马鱼仔鱼心脏周围的凋亡。3.TBOEP可以抑制Wnt信号通路,改变Wnt信号通路相关基因的表达量,具体表现为axin1、axin2和dvl3的表达量显著上升,而fzd、β-catenin、pkc、wnt11、sox9b和nkx2.5的表达量均显著下降。相关分析表明,体长和基因表达量有相关联系(p<0.05)。而在添加了Wnt信号通路的特异性激活剂6-溴靛玉红-3-肟(BIO)后,体长和被改变的基因表达即可恢复正常。4.TBOEP还可以导致氧化应激的发生,损害机体生长发育。在1000μg/L和2000μg/L浓度组中,活性氧ROS的含量分别上升了27.3%和58.3%,而超氧化物歧化酶SOD的活性则显著下降17.9%和23.1%,而在2000μg/L浓度组过氧化氢酶CAT的活性下降了19.4%。综上所述,本研究证实了TBOEP可以导致急性发育毒性和心脏发育毒性效应,并探究其可能的致毒机理,即通过下调Wnt信号通路来抑制斑马鱼早期阶段的生长发育。
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