【摘 要】
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目的:构建含沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)血清型D型外膜蛋白2(outer membrane protein 2,Omp2)167~434位氨基酸编码基因(omp2)的重组表达载体,在大肠杆菌中表达Omp2
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目的:构建含沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)血清型D型外膜蛋白2(outer membrane protein 2,Omp2)167~434位氨基酸编码基因(omp2)的重组表达载体,在大肠杆菌中表达Omp2重组蛋白,纯化表达产物,测定重组蛋白的免疫活性,为探索Omp2重组蛋白在Ct感染诊断中的作用提供实验依据.方法:Ct血清型D型感染McCoy细胞后提取Ct基因组DNA,高保真PCR扩增Omp2蛋白167~434位氨基酸残基的基因片段,将此片段克隆至pUCm-T载体,经酶切和PCR鉴定后,目的片段亚克隆至原核表达载体pET28b(+)中,构建pET28b(+)/omp2重组体,然后转化E.coli BL21(DE3),酶切、PCR和测序验证阳性克隆,挑取单个含重组质粒pET28b(+)/omp2的工程菌阳性克隆进行培养和IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE、Western blot进行分析和鉴定;亲和层析法对重组蛋白进行纯化,BCA法测定纯化的重组蛋白的浓度.用纯化的Omp2重组蛋白(rOmp2)免疫家兔,通过ELISA法检测免疫血清特异性抗体效价.以纯化的rOmp2作为包被抗原,检测Ct感染者阳性血清及对照血清,对rOmp2的免疫反应性作出评价.结论:(1)成功构建了pET28b(+)/omp2原核表达载体,并在大肠杆菌中表达出一相对分子质量约为35×10<3>的重组融合蛋白;(2)rOmp2具有良好的免疫原性,能有效地刺激家兔产生特异性抗体;(3)rOmp2具有良好的免疫反应性,能与Ct感染者阳性血清特异性结合.
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