基于LC-ESI-MS/MS技术的果蝇不同发育阶段N-和O-糖组的分析研究

来源 :西北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tengyao2009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
黑腹果蝇是一种重要的模式生物,具有发育周期短、繁殖力强、易饲养、反应灵敏、遗传背景明确等优点,在生物学各研究领域有不可替代的地位。已有研究表明,果蝇具有与脊椎动物类似的聚糖结构,而且这些聚糖在发育和疾病中的功能与脊椎动物具有相似性。因此,果蝇蛋白糖基化分析对于脊椎动物尤其人类发育及相关疾病机制的研究有重要参考价值。但是,已有报道仅限于对果蝇某些功能蛋白糖基化的考察,尚无关于果蝇不同发育阶段整体糖蛋白糖组表达方面的研究报道,果蝇在不同发育阶段的糖组表达特征及其与发育的关系尚不明确,有待进一步深入研究,从而为以果蝇为模型研究人类发育和相关疾病与蛋白质糖基化的关系提供理论依据。基于此,本研究以PNGase F酶释放N-糖链,以NaOH-PMP体系“一釜法”释放O-糖链,利用电喷雾质谱(ESI-MS)结合在线液质联用(HPLC-MS)分析检测手段,对果蝇胚后发育幼虫、蛹及成虫三个阶段的N-和O-糖组进行了定性定量比较分析,并对果蝇胚胎及其各蛋白组分的N-和O-糖组进行了详细定性定量分析,从而揭示了果蝇不同发育阶段的糖蛋白糖组信息特征及其差异。研究结果如下:1.果蝇不同发育阶段N-和O-糖组的定性定量比较分析。结果表明,在胚后发育过程中,果蝇体内寡聚甘露糖型N-糖链表达量显著下降,而核心岩藻糖基化N-糖链表达水平显著上升,同时伴随Tn抗原和核心1型O-糖链Gal1→3GalNAc表达水平的显著下降以及核心1型O-糖链Gal1→6GalNAc表达水平的显著上升,表明核心岩藻糖基化N-糖链和核心1型O-糖链Gal1GalNAc可能与发育和分化有重要关系。2.果蝇胚胎N-和O-糖组的定性定量分析。结果显示,果蝇胚胎中共有19种N-糖链,其中多数为复杂型N-糖链,核心岩藻糖基化的复杂型N-糖链含量较少但种类较多,有3条单岩藻糖修饰和2条双岩藻糖修饰的N-糖链,所有N-糖链中4条糖链存在分异构体。果蝇胚胎中有8种Mucin型O-糖链,包含Tn抗原、核心1型O-糖链Gal1GalNAc1和1种岩藻糖修饰的O-糖链。推测复杂型N-糖链和核心1型O-糖链Gal1GalNAc可能在胚胎发育过程中与发育及分化有重要的关联性。3.果蝇胚胎SDS-PAGE分离蛋白条带的N-和O-糖链分析。对果蝇胚胎总蛋白进行SDS-PAGE电泳分离,得到8条蛋白条带,分子量分别为300kDa,70kDa,67kDa,60kDa,55kDa,47kDa,35kD,24kDa,分别对它们进行回收,并释放N-糖链和O-糖链进行分析。结果显示,其中5个蛋白条带含寡聚甘露糖型N-糖链Man2GlcNAc2,5 个条带含 Man3GlcNAc2Fuc、Man3GlcNAc5Fuc 和 Man5GlcNAc2 三种N-糖链;8个蛋白条带均含有Tn抗原GalNAc,7个蛋白含有核心1型O-糖链Gal1→6GalNAc,2个蛋白条带含有核心1型O-糖链Gal1→3GalNAc,1个条带含岩藻糖修饰O-糖链FucHex3HexNAc2,1个条带含有O-糖链GlcNAcGalNAc,2个条带含有O-糖链HexHexNAc4。综上推测Tn抗原GalNAc、核心1型O-糖链Gal1→6GalNAc在胚胎发育中发挥了重要作用,另外GalNAc和Gal1→6GalNAc糖高水平表达的蛋白条带1(300KDa)与胚胎的发育和分化有重要关系。
其他文献
2018年10月26日,第13届全国人大常委会第六次会议通过了《关于修改<中华人民共和国刑事诉讼法>的决定》。新《刑事诉讼法》第五编规定了刑事缺席审判程序。内容涉及我国刑事缺席审判的适用范围、管辖法院、司法协助、委托辩护、上诉和抗诉等问题。这是我国在立法中第一次明确规定刑事缺席审判程序。由于被告人没有亲自到庭参加诉讼,所以这对其享有的辩护权、对质权等诉讼权利是一种侵害。应当赋予被告人提
近几年,在信息技术迅猛发展的热潮下,在线学习受到了各界广泛的关注。在在线学习的发展进程中,移动在线学习给人们带来了更大的便捷条件,学习者可以不受地点、时间的限制随时
家用机器人使用的一个重要前提是可以室内定位。视觉传感器可以提供丰富的信息,研究基于视觉的家用机器人的定位具有很重要的意义。本文主要基于视觉的家用机器人的定位技术
视频场景分割是基于内容的视频检索中的重要环节,作为多媒体信息分类与识别的基础,对视频数据的理解发挥着重要作用。其将镜头作为研究的对象,并根据镜头的特征和时间上的关联性将相似的镜头簇划分为同一个场景。传统的视频场景分割方法没有全面考虑视频内容所包含到的语义信息,仅仅是基于视频的底层特征,从而导致场景分割的准确性并不高。Chasanis等人用谱聚类和低层颜色特征聚类,根据以关键帧表示的镜头所属聚类进行
随着社会主义市场经济多方面、全方位的快速发展,高科技不仅仅走进了平常百姓的生活,也给教育带来便捷,教育现代化程度得到很大的提升,既提高了学生素质,也给现代教师的发展提出了新的要求。高中思想政治课是一门集德育性和知识性的课程,在学生成长的道路上有着重要的作用,我们不能单单的发挥高中思想政治课课程性质某一方面的作用来引导学生,应综合两方面从而全方位的提升新时代青少年学生的综合素质。多媒体教学集结了视频
学位
目的:运用电针华佗夹脊穴治疗原发性失眠,观察患者睡眠情况及情绪变化,找到有效、安全的治疗方法。方法:72例失眠患者采用随机数字表法分为两组,每组各36例,治疗组予以电针华佗夹脊穴治疗,对照组予以常规针刺结合电针治疗,每次30min,隔日1次,10次1个疗程,共治疗1个疗程,治疗前及疗程结束后以PSQI、HAMA、HAMD量表进行评分,并以此作为观察指标,疗程结束后分析。结果:1、组内比较:治疗组与
可持续交通与智能物流是现代社会的新概念。对于可持续交通与智能物流的研究展现了可持续性、交通和物流之间的关系,可应用在所有运输方式上来预测未来趋势,并解决当前在城市环境中实施可持续交通和智能物流策略的相关问题。本翻译材料节选自哈维尔·福林著的《可持续交通与智能物流》一书,该书提供了可持续性如何更好地服务交通活动的最新研究,介绍了实现运输终端环境可持续性的实用策略,使交通活动成为用户更好的体验,并降低
草地生态系统碳通量是陆地生态系统碳循环的主要部分,受到越来越多学者的关注。本研究以陇东黄土高原长期自由放牧和围封九年的草地为研究对象,在2014年3月~2015年2月,通过野
业务流程是由一系列业务步骤,完成一个完整的业务行为的过程。流程模型能够以全面简洁的方式表达过程复杂的执行逻辑,但复杂的流程结构和多样的模型元素会导致底层执行人员并不能完全理解和解释流程模型。为了业务流程的正确执行,流程模型的相关文本描述必不可少,同时,文本描述是否完整包含流程模型的活动信息也是重要挑战性问题。本文针对蕴含过程信息的自然语言文本,提出一种基于业务流程建模标注(Business Pro