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益生菌和酶制剂以其对畜禽的良好作用而被广泛用作饲料添加剂,提高动物生长性能。本研究通过将米曲霉、产朊假丝酵母及纤维素酶进行优化组合,制备菌酶复合添加剂,并研究其对育肥湖羊生长性能、瘤胃发酵参数和瘤胃微生物区系的影响,为菌酶复合添加剂的研制及在湖羊应用中提供依据。本研究主要包括以下四部分内容:(1)米曲霉、产朊假丝酵母及纤维素酶发酵条件的优化;(2)菌酶复合添加剂对育肥湖羊生长性能、血清生化指标的影响及经济效益分析;(3)菌酶复合添加剂对育肥湖羊瘤胃发酵参数及消化酶活性的影响;(4)菌酶复合添加剂对育肥湖羊瘤胃微生物区系的影响。研究结果如下:(1)正交试验设计米曲霉、产朊假丝酵母及纤维素酶的复合配比,通过测定其对秸秆中中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、纤维素及半纤维素的影响,以纤维素的降解率为主要指标确定最优复合比例。结果表明:菌酶复合最优比例为米曲霉1×10~6 CFU/g、产朊假丝酵母1×10~6 CFU/g、纤维素酶30 FPU/g风干物质,此时纤维素的降解率显著提高(P<0.05),达到29.41%。将对照组与最优复合比例组发酵7 d,通过测定1 d、3 d、5 d及7 d时秸秆中纤维素的降解率、纤维素酶活、还原糖含量、发酵体系中米曲霉孢子数及产朊假丝酵母活菌数确定最佳发酵时间。结果表明:在发酵第3天时纤维素的降解率最高,达到31.91%,显著高于发酵第1天(P<0.05);且纤维素酶活性最高、还原糖含量最大(P<0.05),为最佳发酵时间。(2)菌酶复合添加剂对育肥湖羊生长性能、血清生化指标的影响及经济效益分析:试验选择156只60日龄、体重在17 kg左右且健康状况良好的雄性育肥湖羊随机分为4组,每组3个重复,每个重复13只羊。A组:对照组,饲喂基础日粮;B、C、D组分别添加0.1%、0.2%和0.3%的菌酶复合添加剂。结果表明:与A组相比,D组30~60 d及1~60 d平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),料重比(F/G)显著降低(P<0.05)。养分表观消化率方面,B、C、D三组ADF的消化率显著提高(P<0.05),B组与C组NDF消化率显著提高(P<0.05)。血清生化指标方面,与A组相比,B组丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量显著降低(P<0.05),D组ALT含量显著升高(P<0.05);C组及D组天门冬氨酸转移酶(AST)、总蛋白(TP)及球蛋白(GLO)含量显著升高(P<0.05);B组及C组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低(P<0.05)。添加0.3%的菌酶复合添加剂利润最高。(3)菌酶复合添加剂对育肥湖羊瘤胃发酵参数及消化酶活性的影响:通过对瘤胃发酵参数及消化酶活性的测定,结果表明:与A组相比,D组瘤胃pH显著降低(P<0.05);B、C、D三组瘤胃氨态氮(NH3-N)含量显著升高(P<0.05),乙酸、丙酸及异丁酸含量均显著降低(P<0.05);B组及D组丁酸含量显著降低(P<0.05);B、C、D三组瘤胃中蛋白酶活性、淀粉酶活性及纤维素酶活性均显著提高(P<0.05)。(4)菌酶复合添加剂对育肥湖羊瘤胃微生物区系的影响:采用16S rRNA对A组与D组瘤胃细菌测序,结果表明:菌酶复合添加剂可以改变瘤胃细菌结构组成;与A组相比,在门水平上,D组显著降低了拟杆菌门(Bacteroidetes)和TM7的丰度(P<0.05),显著增加了放线菌门(Actinobacteria)及蓝藻菌门(Cyanobacteria)的丰度(P<0.05);在属水平上,D组显著增加了欧陆森氏菌属(Olsenella)的丰度(P<0.05),显著降低了YRC22的丰度(P<0.05);相关性分析表明,在瘤胃属水平前10种菌群中,密螺旋体属(Treponema)与NDF消化率及瘤胃NH3-N含量呈极显著正相关(P<0.01),欧陆森氏菌属(Olsenella)与ADF消化率呈显著正相关(P<0.05),与瘤胃pH及丙酸含量呈显著负相关(P<0.05)。采用18S rRNA对A组与D组瘤胃原虫测序,结果表明:D组Alpha多样性指数中的Chao1指数及Observed_species指数显著高于A组(P<0.05);与A组相比,在属水平上,D组内毛虫属(Entodinium)、多腹甲纤毛虫属(Polyplastron)、等毛虫属(Isotricha)丰度显著增加(P<0.05),前毛虫属(Epidinium)和Blepharocorys丰度显著降低(P<0.05);在种水平上,D组显著增加了Polyplastron sp.LDK-2011、Entodinium furca、Isotricha sp.LDK-2011的丰度(P<0.05),显著降低了Epidinium ecaudatum、Entodinium bursa、Entodinium nanellum、Blepharocorys angusta的丰度(P<0.05);相关性分析表明,在瘤胃属水平前5种原虫中,Entodinium与育肥湖羊ADG呈正相关,Epidinium与ADG呈负相关;Polyplastron与NDF消化率呈极显著正相关(P<0.01),与瘤胃pH呈显著负相关(P<0.05),Isotricha与瘤胃中丙酸含量呈显著负相关(P<0.05)。综上所述,菌酶复合可以提高发酵体系中秸秆的纤维素降解率。在育肥湖羊饲粮中添加0.3%的菌酶复合添加剂可以提高育肥湖羊日增重,降低料重比,提高饲粮中ADF的消化率;提高血清中TP及GLO含量;降低瘤胃pH,提高瘤胃NH3-N含量;降低瘤胃内Bacteroidetes丰度,同时可以提高Olsenella的丰度,其与ADF消化率呈显著正相关,有助于提高饲粮中纤维的消化率;提高Polyplastron和Isotricha的丰度,有助于提高瘤胃内纤维素酶及淀粉酶活性,提高饲粮利用率。