【摘 要】
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目的:头颈部鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）是常见的恶性肿瘤。随着基础及临床研究的进一步深入,头颈鳞癌的治疗手段较以前更加丰富,但5年生存率仍有待提高。这主要是由于大多数头颈鳞癌患者早期大多没有明显的临床症状,且头颈鳞癌易发生早期转移,同时目前临床上缺乏特异性的诊断分子标志物,大多数患者确诊时往往已至中晚期,从而影响了头颈鳞癌的治
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目的:头颈部鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）是常见的恶性肿瘤。随着基础及临床研究的进一步深入,头颈鳞癌的治疗手段较以前更加丰富,但5年生存率仍有待提高。这主要是由于大多数头颈鳞癌患者早期大多没有明显的临床症状,且头颈鳞癌易发生早期转移,同时目前临床上缺乏特异性的诊断分子标志物,大多数患者确诊时往往已至中晚期,从而影响了头颈鳞癌的治疗效果。在头颈鳞癌发生发展过程中,上皮间充质转化（Epithelial-mesenchymal transformation,EMT）起到了重要的作用,有研究证明m6A RNA甲基化在多种肿瘤中与EMT过程具有相关性。最近的表观遗传学研究表明,在RNA甲基化修饰中,m RNA的N6-Methyladenosine（M6A）是m RNA最丰富的内部修饰,m6A RNA甲基化在细胞中功能丰富,它可以参与调控m RNA的剪接、出核、稳定性,并对蛋白翻译、稳定性、功能等多个生物学过程产生重要影响。目前的研究表明,甲基转移酶样3（methyltransferase-like3,METTL3）的缺失会下调m6A甲基化,并在体内外抑制癌细胞的迁移、侵袭和EMT。本实验即通过对m6A甲基化在HNSCC中与EMT通路交互机制的研究来为HNSCC诊断与治疗提供新的思路。方法:1.下载TCGA公开数据库中关于HNSCC的数据,提取出m6A相关基因的表达量及对应临床信息。通过分析肿瘤组与正常组基因表达差异量,确定关键基因并构建生存预测模型。2.体外培养8113细胞株,并利用慢病毒构建METTL3沉默细胞株。利用TGF-β药物诱导NC组细胞和METTL3-组细胞上皮间质转化,获得四组细胞（NC组;METTL3-组;NC/EMT组;METTL3-/EMT组）,并通过q RT-PCR、划痕实验和侵袭试验予以验证。结果:1.TCGA数据库中,头颈鳞癌患者m6A甲基化相关基因通路较正常组明显活跃,METTL3明显高表达。2.METTL3的沉默明显抑制了EMT通路的活性及肿瘤细胞的侵袭与转移能力。结论:1.在HNSCC中,m6A RNA甲基化通路高度活跃,相关酶的基因表达量同正常组织具有较大的差异,其中METTL3在HNSCC中显著高表达。2.METTL3与HNSCC EMT通路关键基因具有相关性,METTL3可能通过m6A甲基化激活EMT通路的机制,促进了头颈鳞状细胞癌的侵袭与转移。并从细胞水平验证了生信分析结果。3.METTL3可能作为未来HNSCC早期诊断与精准治疗的新靶点。
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