目的:百草枯进入人体后可诱导氧化应激和炎症反应,导致人体多个器官发生损害,尤其是急性肺损伤。目前,有关百草枯中毒肺损伤的发病机制尚未完全阐明,也无有效治疗手段及特效解毒剂。脂氧素A4具有抗炎、促炎症消退、损伤修复及抗氧化作用,因此推测其对百草枯中毒急性肺损伤可能具有一定的保护作用。本研究通过体内外实验研究脂氧素A4对百草枯中毒诱导急性肺损伤的保护作用及可能的生物学机制。研究方法:本实验研究选择雄性SD大鼠和RAW264.7小鼠巨噬细胞作为实验对象,使用百草枯建立急性肺损伤模型,并于中毒后给予脂氧素A4作为治疗药物。在体内研究方面,将SPF级健康的雄性SD大鼠随机分为四组,分别设置为正常对照组、百草枯中毒组、百草枯中毒+脂氧素A4治疗组和脂氧素A4组。通过一次性腹腔注射20mg/kg剂量的百草枯构建大鼠中毒急性肺损伤模型,染毒1h后予以尾静脉注射脂氧素A4（2ug/kg）进行治疗干预,48小时后处死大鼠并收集BALF和肺组织标本。通过H&E染色和肺湿/干重比值测定评估每组大鼠急性肺损伤的严重程度,测定肺组织中超氧化酶歧化酶和丙二醛的水平以评估肺组织氧化损伤程度,ELISA法检测中毒后大鼠肺泡灌洗液中促炎因子TNF-α、IL-1β的分泌水平,RT-PCR技术评估大鼠肺组织中TLR4、MyD88、TRAM、TRIF、TNF-α和IL-1β的m RNA水平,并使用Western-blot法检测TLR4、MyD88、PI3K、PPI3K、AKT、P-AKT、核NF-κB p65、IκBα及P-IκBα的蛋白表达水平,反映百草枯中毒后大鼠肺损伤的炎症水平及其可能机制。在体外研究方面,RAW264.7小鼠巨噬细胞同体内研究分组,被随机分为正常对照组、百草枯中毒组、百草枯中毒+脂氧素A4治疗组和脂氧素A4组。药物作用24h后,收集细胞上清及细胞。CCK-8法用于检测细胞生存率,活性氧试剂盒测定药物刺激后细胞中活性氧释放水平,反映细胞受到氧化损伤的程度,同时使用ELISA法、RT-PCR法及Westernblot方法检测促炎细胞因子及相关因子的m RNA及蛋白水平。为了进一步验证LXA4治疗PQ中毒的具体机制,我们构建了细胞水平中TLR4的过表达。我们将GV417载体构建的TLR4质粒转染到细胞中实现TLR4的过表达。转染后,通过Western Blot及q RT-PCR评估TLR4的表达水平。随后使用TLR4质粒转染细胞24h,采用百草枯（100μM）对RAW264.7肺泡巨噬细胞进行染毒处理,染毒1h后,使用脂氧素A4（100 n M）处理染毒RAW264.7巨噬细胞,作用24h后使用ROS试剂盒检测活性氧ROS含量、ELISA法及RT-PCR法分别测定细胞中TNF-α、IL-1β释放水平及其m RNA水平、Western Blot法检测下游关键分子MyD88、IκBα、p IκBα、核NF-κBp65、P-PI3K、P-AKT相关蛋白表达情况。结果:百草枯中毒后大鼠肺组织结构完整性破坏,出现明显肺水肿。肺组织抗氧化酶超氧化物歧化酶SOD活性降低,而促氧化酶丙二醛MDA含量明显增加。肺泡灌洗液中促炎因子TNF-α、IL-1β分泌水平明显增加,肺组织中TLR4、MyD88、TRAM、TRIF、TNF-α、IL-1β的基因水平显著升高,且Western Blot结果显示TLR4、MyD88、p IκBα、P-PI3K、P-AKT蛋白表达明显增加,NF-κBp65发生明显核转移。经过脂氧素A4治疗后,百草枯中毒急性肺损伤程度减轻,降低氧化应激和炎症水平,抑制TLR4、MyD88的活化,而对TRAM及TRIF的活化不起作用,同时抑制了PI3K、AKT、IκBα的磷酸化及NF-κBp65核转移。体外实验结果同样表明LXA4治疗可减轻PQ对细胞的毒性刺激作用,降低活性氧表达水平,同时可抑制TLR4介导的PI3K/AKT/NF-κB信号通路活化,从而减轻炎症损伤。结论:总而言之,本研究的体内外实验表明,脂氧素A4通过抑制TLR4/MyD88介导的PI3K/AKT/NF-κB信号途径的活化负性调控百草枯诱导的炎症和氧化应激反应,对百草枯诱导的急性肺损伤发挥保护作用。