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第一章肝癌ITC的检测在预测肝癌肝移植术后复发与转移中应用价值的研究.目的:建立肝癌患者外周血循环中ITC的分子生物学检测方法,了解ITC细胞在肝癌肝移植术的围手术期变化情况,探讨对肝癌ITC细胞标志物的联合检测在预测术后肝癌复发和转移中的应用价值,以期为在临床肝癌肝移植的受体选择、术后复发转移的预测及预后评估等方面能建立一种简便、快速、准确的检测方法提供参考.方法:将研究对象分为肝癌组(53例肝癌肝移植患者)、晚期肝癌组(8例晚期肝癌患者)、良性肝病组(26例良性终末期肝病患者)、正常对照组(10例健康志愿者),其中肝癌组以UCSF(University of California at San Francisco)肝癌肝移植标准细分为UCSF组和大肝癌组.通过建立稳定可靠的荧光基因探针杂交定量技术检测方法,来定量联合检测肝癌组外周血中3种ITC标志物血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA、甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)mRNA和米托葸醌抗性基因(Mitoxantrane-resistant 7,MXR7)mRNA在整个肝移植术围手术期的动态变化情况,同时也对比检测了晚期肝癌组、良性肝病组和正常对照组的外周血中这3种ITC标志物的表达情况;将肝癌组患者的ITC表达情况与其临床病理特征进行相关分析,并进一步了解ITC表达在以UCSF标准为依据的不同分组的表达差异及与预后的关系.对肝癌肝移植患者的围手术期ITC细胞的不同表达情况与术后复发和转移进行相关分析.结论:(1)荧光定量RT-PCR检测ITC细胞标志物具有简便,快捷,高灵敏度,高特异性等特点.(2)VEGFmRNA、AFPmRNA和MXR7mRNA具有较好的灵敏性和特异性,可以作为肝癌ITC标志物用于临床上对ITC细胞的检测.实时荧光定量RT-PCR技术可以在定量水平上有效区分ITC的来源,避免假阳性的发生(3)术前VEGFmRNA检测阳性和术后持续的ITC标志物检测阳性可以有效预测肝癌肝移植术后肿瘤复发和转移.(4)肝癌ITC细胞标志物的联合检测可以明显提高检测的灵敏度、特异性和总的诊断符合率.第二章微卫星变异的出现在肝癌肝移植术后复发和转移中作用的研究.目的:研究原发性肝癌微卫星变异(microsatellite alteration,MA)的特点,探讨其与肝癌的临床病理特征的相关性及与肝癌肝移植术后复发和转移的关系.方法:选取1号、4号、8号、13号、16号、17号、和18号染色体上的10个多态性微卫星位点,采用聚合酶链式反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)方法,对肝癌组织和伴随的慢性肝病组织的微卫星变异情况进行分析.结论:(1)原发性肝癌的发生、发展与多染色体的微卫星变异有关,而肝硬化等慢性肝病作为肝癌的早期表象就已经存在微卫星变异.(2)在中国以慢性乙型肝炎、肝硬化为背景的肝癌中,以LOH为代表的抑癌基因失活途径可能起着主要作用,而与以MSI为代表的错配修复机制可能无关.(3)13q14.1-14.3和16q23-24染色体上的LOH的发生与肝癌肝移植术后的复发和转移有关.