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目的： 研究芍药苷通过腺苷A1受体抑制lipopolysaccharide(LPS)诱导致小鼠乳鼠内毒性心肌细胞损伤中的作用机制. 方法： 1.采用SPF级0-3天龄的雄性昆明乳鼠,使用原代心肌细胞培养技术. (1)使用LPS诱导心肌细胞损伤模型,通过乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞上清LDH活性以筛选用于刺激心肌细胞的LPS浓度. (2)使用芍药苷预处理心肌细胞,筛选芍药苷(paeoniflorin,Pae)抑制LPS诱导心肌细胞损伤具有保护作用的药物应用浓度. (3)使用特异性腺苷A1受体阻滞剂(8-cyclopenty1-1,3-dipropylxanthine,DPCPX)预处理心肌细胞,阻断腺苷A1受体,应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖-毒性,研究芍药苷对LPS诱导小鼠乳鼠心肌细胞损伤所起的保护作用是否会被腺苷A1受体阻滞剂DPCPX阻断,并筛选出DPCPX的给药浓度.按此三种药物浓度对心肌细胞进行处理,后续实验分组如下:①培养液(DMEM)组;②LPS100ug/ml组;③Pae25umol/L+LPS100ug/ml组;④Pae50umol/L+LPS100ug/ml组;⑤DPCPX100nmol/L组;⑥DPCPX100nmol/L+Pae25umol/L+LPS100ug/ml组;⑦DPCPX100nmol/L+Pae50umol/L+LPS100ug/ml组;⑧LPS100ug/ml+DPCPX100nmol/L组;⑨二甲基亚砜(DMSO)组;⑩LPS100ug/ml+DMSO组;?Pae25umol/L组;?Pae50umol/L组. 2.按实验分组加LPS处理6h后提取心肌细胞上清液,用试剂盒检测心肌细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)水平.研究Pae与心肌细胞的腺苷A1受体对LPS诱导心肌细胞损伤氧化应激的影响. 3.按实验分组加LPS处理6h后提取蛋白,用蛋白质印迹法(Western Blot)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)亚型p38MAPK、c-jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化表达水平.研究腺苷A1受体在Pae抑制LPS诱导小鼠乳鼠心肌细胞损伤的作用机制. 结果： 1.LPS作用6h后,细胞培养上清液LDH水平与DMEM对照组相比,具有统计学差异(P<0.05),使用LPS100ug/ml可以建立小鼠乳鼠心肌细胞损伤模型. 2.使用Pae预处理心肌细胞1h后,再加入造模药物LPS,作用6h,LPS+Pae25umol/L、LPS+Pae50umol/L组细胞上清液LDH水平与单纯LPS组相比,具有统计学差异(P<0.05),DMEM、Pae对照组细胞上清液LDH水平无统计学差异(P>0.05). 3.DPCPX+Pae25+LPS组、DPCPX+Pae50+LPS组与Pae25+LPS组、Pae50+LPS组相比,活细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),而DMEM组,单纯Pae组,单纯DPCPX各对照组间差异无统计学意义(P>0.05). 4.SOD活性检测结果:(1)LPS给药组SOD活性低于DMEM组;(2)LPS给药组SOD活性低于LPS+Pae25、LPS+Pae50组(P<0.05);(3)DPCPX+Pae25+LPS组、DPCPX+Pae50+LPS组SOD活性低于Pae25+LPS组和Pae50+LPS组(P<0.05);(4)DMEM对照组与DPCPX对照组相比,LPS对照组与DPCPX+LPS对照组相比,SOD活性无显著性差异(P>0.05).MDA值检测结果:(1)LPS给药组MDA值高于DMEM组;(2)LPS组MDA值高于LPS+Pae25、LPS+Pae50组(P<0.05);(3)DPCPX+Pae25+LPS组、DPCPX+Pae50+LPS组MDA值高于Pae25+LPS组和Pae50+LPS组(P<0.05);(4)DMEM对照组与DPCPX对照组相比,LPS对照组与DPCPX+LPS对照组相比,MDA值无显著性差异(P>0.05). 5.Western Blot检测结果:小鼠心肌细胞P38与JNK磷酸化水平变化如下:LPS组、LPS+DPCPX组、LPS+DMSO组高于DMEM组(P<0.05);Pae25+LPS、Pae50+LPS组低于LPS组(P<0.05);DPCPX+Pae25+LPS、DPCPX+Pae50+LPS组高于Pae25+LPS、Pae50+LPS组(P<0.05);LPS+DMSO、LPS+DPCPX与LPS组相比,小鼠乳鼠心肌细胞磷酸化水平无显著性差异(P>0.05). 结论： (1)一定浓度的芍药苷具有抑制由LPS诱导心肌细胞损伤的作用.芍药苷可通过介导腺苷A1受体降低小鼠乳鼠心肌细胞氧化应激水平,该作用可被特异性腺苷A1受体阻滞剂DPCPX阻断. (2)芍药苷介导腺苷A1受体对LPS诱导心肌细胞损伤起保护作用,可能与激活并调节MAPKs信号通路中P38与JNK的磷酸化水平密切相关.