【摘 要】
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肠道不仅是人体消化食物、吸收营养的重要器官,也是预防病原微生物和内毒素如脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）等入侵机体的屏障。肠道屏障损伤是多种疾病发生、发展的重要因素。因此,寻求有效膳食相关干预措施保护肠道屏障功能意义重大。南极磷虾油（Krill oil,KO）富含磷脂型EPA和DHA以及虾青素等生物活性成分,具有良好的营养价值和健康功效,但鲜见其保护肠道屏障功能的研究报道。基
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肠道不仅是人体消化食物、吸收营养的重要器官,也是预防病原微生物和内毒素如脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）等入侵机体的屏障。肠道屏障损伤是多种疾病发生、发展的重要因素。因此,寻求有效膳食相关干预措施保护肠道屏障功能意义重大。南极磷虾油（Krill oil,KO）富含磷脂型EPA和DHA以及虾青素等生物活性成分,具有良好的营养价值和健康功效,但鲜见其保护肠道屏障功能的研究报道。基于此,本研究通过建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型以及LPS所致小鼠肠道屏障损伤模型,考察KO对肠道屏障功能的保护作用并探讨其作用机制。首先,将不同浓度KO与RAW264.7细胞共培养24h,随后加入100 ng/mL的LPS继续培养24h。实验结果发现:KO在0-500μg/mL浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用;预防性干预100、200和500μg/mL的KO可有效抑制LPS诱导的NO释放、iNOS蛋白表达以及促炎细胞因子如TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平的升高,且呈剂量-效应关系;Western blotting结果表明预防性干预KO可阻止TLR4/NF-κB/MAPKs信号通路的活化。免疫荧光染色结果证实预防性干预KO可显著抑制NF-κB入核;此外,KO还能减少LPS所致活性氧大量生成,上调抗氧化蛋白Nrf2和HO-1表达。上述实验结果表明预防性干预KO能有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应与氧化应激。随后,选取32只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:正常对照组、LPS组、KO干预组和鱼油（fish oil,FO）干预组。前两组灌胃橄榄油,后两组分别灌胃400 mg/kg·bw以橄榄油为溶剂稀释的KO或FO,灌胃量为0.1mL/20g·bw,每日1次。连续干预4周后,正常组小鼠腹腔注射生理盐水,其余三组注射LPS（10 mg/kg·bw）,6h后处死小鼠。实验结果发现,预防性干预KO 4周可显著抑制LPS所致小鼠小肠组织肠绒毛长度与隐窝深度比值的降低;提高小肠组织中二胺氧化酶活性,并降低血清中二胺氧化酶活性;上调肠道紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达水平;TUNEL染色结果发现KO能改善LPS所致肠上皮细胞凋亡;Western blotting结果表明KO能显著降低小肠组织中Bax/Bcl-2比值,抑制cleaved caspase-3蛋白表达水平。本研究还发现,KO可有效抑制LPS所致小肠组织中髓过氧化物酶活性、NO含量、促炎细胞因子或介质mRNA或蛋白表达的升高,其抗炎分子机制可能与抑制TLR4/NF-κB/MAPKs信号通路活化有关。KO还可抑制LPS诱导的小肠组织中MDA含量的增加,增强总抗氧化能力并提高CAT和SOD活性以及GSH含量,其改善氧化应激作用机制可能与激活Nrf2/HO-1抗氧化信号通路有关。另外,与FO干预组相比,KO在保护肠道屏障功能的效果更佳。综上,KO具有良好的抗炎和抗氧化活性。预防性干预KO可通过改善LPS诱导的肠道炎症反应和氧化应激,上调肠道组织紧密连接蛋白表达并减轻肠上皮细胞凋亡,进而有效保护LPS所致肠道屏障损伤。其分子机制可能与抑制TLR4/NF-κB/MAPKs信号通路以及激活Nrf2抗氧化信号通路有关。
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