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以cDNA文库为基础的ESTs(Expressed Sequence Tags,表达序列标签)技术是一种快速进行基因功能分析及发现新基因的方法。为了开展我国特色椪柑的基因发掘研究,本文构建了椪柑花和幼果的cDNA文库,并以该文库为材料进行5’端EST测序和生物信息学分析。主要结果如下:1、以改良的异硫氰酸胍法从椪柑花和幼果中提取总RNA,分离纯化富含PolyA的mRNA,经反转录酶反转录合成双链cDNA,通过CHROMAS PIN-400柱筛选出其中大于500 bp的片段与载体pDNR-LIB连接,最后用电转化法转化宿主菌ElectroMAXDH5a,构建了椪柑花和幼果的cDNA文库。经质量检测,初级文库的库容为1.13×10~8个/mL,符合高质量文库的要求。文库的重组率为97%,且插入片段的长度在0.5-2.5 kb之间,说明文库完整、有效,可用于大规模EST序列测定及数据分析。2、从椪柑花和幼果cDNA质粒文库中随机选取503个克隆进行测序,经CAP3软件编辑后,获得长度大于100 bp的有效序列为487条,其序列的平均长度为522bp,序列平均质量数为36.25;另外通过GC含量分析获得EST的GC含量为40.49%。利用CAP3软件对487条有效EST序列进行片段重叠群分析和拼接后共获得298个独立基因(Unigene),其中包括27个片段重叠群(Contig)和271个独立的ESTs(Singlet)。3、将独立基因(Unigene)以GeneOntology进行功能分类。按照GO的分子功能、生物过程和细胞组分三个不同分类角度分类,把通过BlastX比对获得椪柑有功能描述基因(包括功能确定的及推测功能的)分为11类,即代谢相关基因(Metabolism)占功能描述基因的21.02%、蛋白质合成相关基因(Protein synthesis)占功能描述基因的19.89%、能量代谢相关基因(Energy)占8.52%、细胞内运输相关基因(Transporters)占9.09%、转录相关基因(Transcription)占14.20%、信号转导相关基因(Cellular signal transduction)占4.55%、细胞生长发育相关基因(Cell growth anddivision)占3.98%、细胞抗性及防御相关基因(Disease and defence)占8.52%、细胞结构相关基因(Cell structure and Cellcycle)占3.41%、次生代谢相关基因(Secondarymetabolism)占3.41%、蛋白质降解相关基因(Protein destination and storage)占3.41%。