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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁女性健康,发病率呈逐年上升且年轻化的趋势。乳腺肿瘤的发病是一个长期累积的过程。其发病分子机制尚不清楚。随着分子生物学和基因诊断技术的进步,除了已知和乳腺癌发生相关的基因之外,近年来又发现了乳腺癌密切相关的基因,这些基因在乳腺癌中扮演着重要角色。长链非编码RNAs(large intergenic noncoding RNAs,1ncRNAs)是转录本度超过200nt的一类RNA分子,这类RNA不编码蛋白,而是以RNA的形式在表观遗传调控、转录调控,翻译及翻译后等水平,可以和生物分子互相作用,参与许多生理和病理的调控。HOTTIP来源于Hox基因的长链非编码RNA,HOTTIP在多种肿瘤进展中发挥重要作用。HOTTIP可促进多种肿瘤细胞的侵袭和转移,在肿瘤中起潜在的致癌作用并且是患者预后不良的预测因素。研究表明lncRNA HOTTIP高表达可作为乳腺癌不良预后指标。但是lncRNA HOTTIP对乳腺癌细胞侵袭转移及其相关分子机制的影响尚不明确,有待进一步深入研究。目的:探讨HOTTIP在乳腺癌组织中的表达水平及与临床病理学指标的关系;探讨HOTTIP对乳腺癌细胞迁移、侵袭的影响;HOTTIP对乳腺癌细胞EMT的影响;HOTTIP对Wnt/β-catenin通路激活的影响;明确HOTTIP干扰对乳腺癌细胞体内转移能力的影响方法:应用qRT-PCR法检测乳腺癌组织和配对的癌旁组织中HOTTIP的表达水平,统计分析HOTTIP表达水平与临床病理指标的关系;构建HOTTIP干扰质粒,通过G418筛选建立稳定HOTTIP沉默的乳腺癌细胞系。通过划痕实验和transwell实验测定细胞迁移和侵袭。下调HOTTIP,运用Western blot检测EMT关键蛋白表达水平变化。下调HOTTIP,运用Western blot检测Wnt/β-catenin通路关键分子的表达水平变化。HOTTIP干扰细胞转染β-catenin-S33Y质粒,逆向激活Wnt/β-catenin信号通路,运用划痕实验检测细胞迁移能力变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化,运用Western blot检测Wnt/β-catenin通路关键分子的表达水平变化;取2.5×10~5个处于对数生长期的细胞悬液于100μl PBS,经尾静脉注射于6-8周龄的裸鼠,共两组:NC组和HOTTIP干扰组。细胞接种6周后,处死所有小鼠取肺组织并拍照,HE染色检测各组肺组织的形态,分析各组裸鼠肺转移结节数目。结果:结果显示乳腺癌组织具有比癌旁组织更高的HOTTIP表达。TNM III-IV期和淋巴结转移的患者具有较高的HOTTIP表达;HOTTIP敲低抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。HOTTIP敲低抑制上皮-间质转化(EMT)。HOTTIP下调后通过阻断Wnt/β-catenin蛋白途径抑制细胞迁移,侵袭和EMT;HOTTIP沉默的小鼠肺转移结节数目(平均7.67),control组肺转移结节数目(平均12.67)。结论:乳腺癌组织中HOTTIP高表达。相比较HOTTIP低表达的患者,HOTTIP高表达的患者肿瘤临床分期更高,淋巴结更易出现转移;HOTTIP通过调节Wnt/β-catenin途径影响乳腺癌细胞的迁移、侵袭和EMT;HOTTIP沉默的小鼠与control组相比,具有显著更少的肺转移结节数,这表明HOTTIP敲低可以抑制体内肿瘤转移。