目的：　　以大鼠海马组织及SH-SY5Y 细胞为研究对象，通过免疫组织化学、Western blot、RT-PCR技术，观察去势、雄激素补充、细胞补充雄激素培养对NEP、CD147表达的影响。探讨雄激素在Aβ清除中的作用机制。　　方法：　　1 自然衰老雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠海马内NEP、CD147的蛋白表达　　实验选用3月龄及20月龄健康雄性SD大鼠各5只，分3月龄组（3 m）和20月龄组（20 m）。10%水合氯醛麻醉断头取脑，冰上快速剥离海马组织至于RIPA裂解液内，超声破碎后低温离心取上清。BCA法测定蛋白浓度、组织变性。SDS-聚丙烯酸氨凝胶电泳、转膜、孵育抗体。Odyssey红外激光扫描成像系统显影，以GAPDH为内参，测定两组蛋白相对表达水平。　　2 去势及DHT补充对SD雄性大鼠海马组织中NEP、CD147表达的影响　　实验选用3月龄健康雄性SD大鼠72只，随机分假手术组（Sham组），去势组（GDX组）和去势+DHT补充治疗组（DHT）组，每组24只。DHT组及GDX组行去势手术，Sham组保留睾丸，3 d后DHT组大鼠给予腹腔注射DHT（5 ug/ul，注射剂量500 ug/kg.d），GDX组和Sham组给予等量玉米油腹腔注射。连续给药30 d。　　2.1 Elisa法检测血清DHT水平　　每组取12只SD大鼠，麻醉后断头取血静置后，3000 rpm 20 min 离心取上清，-20℃保存待测，采用Elisa法检测血清DHT水平。剥离后海马组织取一侧放入EP管内置于液氮中备用。另一侧于超声粉碎机内粉碎，冰置5 min后，低温高速离心机分离，取上清约300 ul，备用。　　2.2 Western blot检测海马组织中雄激素受体（AR）、NEP、CD147的蛋白表达　　将2.1中一侧海马组织进行Western blot检测，分别孵育AR、NEP、CD147一抗，以GAPDH为内参测定各组中AR、NEP、CD147的相对表达水平。　　2.3 RT-PCR检测海马组织中NEP、CD147的mRNA表达　　将2.1中另一半海马组织进行RNA提取、反转录、聚合酶链式反应（PCR）、琼脂糖凝胶电泳，紫外线成像系统检测，以β-actin为内参测定两组RNA中NEP、CD147的相对表达水平。　　2.4 免疫组织化学方法检测海马组织中NEP、CD147的表达　　每组取12只SD大鼠，麻醉后经心灌注多聚甲醛，断头取脑，选取视交叉至上丘节段脑组织进行石蜡切片，免疫组织化学染色分别孵育NEP、CD147一抗，DAB显色。正置显微镜下观察照相，观察阳性表达部位，测定平均光密度值（AOI）。　　3 DHT对SH-SY5Y细胞中NEP、CD147表达的影响　　DMEM-F12培养基、37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。随机分为对照组（Con组）及DHT干预组（DHT组），DHT组给予100 nM DHT作用12 h，对照组给予等量DMSO。利用免疫细胞荧光染色观察NEP、CD147在SH-SY5Y细胞中的表达及定位；RT-PCR和Western blot 检测NEP、CD147的RNA和蛋白表达变化。　　结果：　　1. 自然衰老雄性SD大鼠海马内NEP、CD147的蛋白检测结果　　NEP的Western blot结果显示：与3月龄组（0.54±0.04）相比，20月龄组（0.35±0.07）的蛋白水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147的Western blot结果显示：与3月龄组（0.90±0.09）相比，20月龄组（0.59±0.12）的蛋白水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　2. 去势及DHT补充对SD雄性大鼠海马组织中NEP、CD147表达的影响　　2.1血清DHT的Elisa结果　　与Sham组（845.89±81.26）相比，GDX组（47.89±7.47）血清DHT水平均明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与GDX组（47.89±7.47）相比，DHT组（688.83±83.07）显著性升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　2.2 Western blot检测AR、NEP、CD147蛋白结果　　AR的Western blot检测结果显示：与Sham组（1.13±0.04）相比，GDX组（0.63±0.10）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.63±0.10）相比，DHT组（0.99±0.13）有所增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　NEP的Western blot检测结果显示：与Sham组（0.92±0.13）相比，GDX组（0.59±0.12）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.59±0.12）相比，DHT组（0.72±0.09）有所增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147的Western blot结果显示：与Sham组（2.41±0.62）相比，GDX组（1.51±0.30）的蛋白水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（1.51±0.30）相比，DHT组2.04±0.29）有所升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　2.3 RT-PCR检测NEP、CD147的mRNA结果　　NEP的RT-PCR结果显示：与Sham组（0.78±0.08）相比，GDX组（0.50±0.09）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.50 ±0.09）相比，DHT组（0.63±0.07）有所升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147的RT-PCR结果显示：与Sham组（0.70±0.09）相比，GDX组（0.41±0.08）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.41±0.08）相比，DHT组（0.65±0.06）有所升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　2.4 免疫组织化学染色结果　　NEP染色结果：镜下观察可见海马CA1区、CA3区和齿状回弱表达NEP，在海马CA4区NEP阳性细胞表达显著增加，主要位于胞浆和轴突。CD147染色结果：镜下观察可见海马CA1区、CA3区、CA4区及齿状回均表达CD147，阳性反应部位主要位于胞浆、胞膜。　　NEP光密度值分析结果：①CA1区，与Sham组（0.098±0.010）相比，GDX组（0.081±0.006）的表达随有所降低，但无统计学差异（P＞0.05）；与GDX组（0.081±0.006）相比，DHT组（0.089±0.009）略有升高，但无统计学差差异（P＞0.05）。②CA3区，与Sham（0.118±0.013）组相比，GDX组（0.076±0.011）的蛋白水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.076±0.011）相比，DHT组（0.086±0.012）有所升高，但无统计学差异（P＞0.05）。③CA4区，与Sham组（0.203±0.013）相比，GDX组（0.120±0.011）的蛋白水平明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.120±0.011）相比，DHT组（0.192±0.013）的蛋白水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147光密度值分析结果：①CA1区，与Sham组（0.248±0.017）相比，GDX组（0.197±0.012）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.197±0.012）相比，DHT组（0.236±0.017）明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。②CA3区，与Sham组（0.220±0.035）相比，GDX组（0.137±0.020）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.137±0.020）相比，DHT组（0.160±0.022）明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。③CA4区，与Sham组（0.189±0.013）相比，GDX组（0.145±0.012）明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与GDX组（0.145±0.012）相比，DHT组（0.155±0.011）有所升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　3. DHT对SH-SY5Y细胞中NEP、CD147表达的影响　　3.1 Western blot结果　　NEP的Western blot结果显示：与Con组（0.47±0.07）相比，DHT组（0.76±0.06）的蛋白水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147的Western blot结果显示：与Con组（1.39±0.07）相比，DHT组（2.27±0.24）的蛋白水平明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　3.2 RT-PCR结果　　NEP的结果显示：与Con组（0.80±0.04）相比，DHT组（0.91±0.04）水平明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147的结果显示：与Con组（1.05±0.05）相比，DHT组（1.41 ±0.06）水平明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　3.3 免疫细胞荧光染色结果　　NEP的免疫细胞荧光化学染色结果显示：NEP在胞浆及轴突上表达；与Con组（0.145±0.015）相比，DHT组（0.250±0.045）表达升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　CD147的免疫细胞荧光化学染色结果显示：CD147在胞浆、胞膜及轴突上表达；与Con组（0.145±0.033）相比，DHT组（0.253±0.059）表达升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1. 雄性衰老SD大鼠海马组织中NEP、CD147蛋白表达水平降低。　　2. 雄性SD大鼠去势后海马组织中AR、NEP和CD147表达水平降低，给予DHT补充治疗后，AR、NEP和CD147表达水平增加。　　3. DHT能增加SH-SY5Y细胞中NEP和CD147的表达。