七鳃鳗HBP1基因的克隆、表达及生物学活性研究

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HMG转录因子1(HMG-box transcription factor1, HBP1)是高泳动蛋白家族成员。人HBP1是一种转录抑制因子,含有513个氨基酸残基,可与RB蛋白结合,抑制促细胞分裂基因的表达,从而抑制细胞的增殖。近期工作表明,HBP1转录因子和p38MAPK信号通路共同参与细胞周期调控细胞早衰及抑制肿瘤的生长。此外,HBP1与Wnt信号通路中的蛋白相互作用抑制肿瘤生长。这些发现可以提供一个新的肿瘤抑制网络,进而可能有助于癌症的诊断和治疗。七鳃鳗是目前为止所知的最为原始的无颌脊椎动物,对于研究物种的进化有重要意义。前期在七鳃鳗细胞体外培养中,发现七鳃鳗的细胞具有分裂缓慢,周期长等特点。这表明七鳃鳗中存在着能够使细胞周期滞留的一些基因。通过前期的研究,在七鳃鳗类淋巴细胞的cDNA库中寻找到了与人等脊椎动物同源性较高的HBP1基因,反转录之后取得七鳃鳗HBP1的cDNA全长序列。其中七鳃鳗HBP1基因的开放阅读框(ORF)为1584bp,编码527个氨基酸,七鳃鳗HBP1蛋白的分子量预测为58kD。荧光实时定量PCR检测,结果表明七鳃鳗HBP1普遍存在于七鳃鳗各组织中;对七鳃鳗HBP1进行一系列的生物信息学分析结果显示:七鳃鳗HBP1蛋白并不具有信号肽序列,也不具有跨膜结构域;亚细胞定位预测显示七鳃鳗HBP1蛋白与其他高等动物如人类相同,主要定位于细胞核中;其二级结构主要由无规则卷曲构成,约占总比的50%;功能结构域主要由AXH结构域以及HMG结构域组成;进化树分析显示,七鳃鳗HBP1位于进化树的最底端,是脊椎动物的祖先,同时又与鱼类有很高的同源性,这些都符合七鳃鳗在进化中所处的地位。本文构建七鳃鳗HBP1原核表达载体pET32a-HBP1,并将其转入BL21表达菌种,获取了重组蛋白,呈包涵体表达状态。另外构建了含有七鳃鳗HBP1目的基因的重组腺病毒载体,并检测和鉴定重组腺病毒的滴度,其结果符合标准。将其转染入Raji细胞中,细胞生长曲线的测定以及细胞集落实验结果均显示七鳃鳗HBP1能够有效抑制Raji细胞的增殖。结果提示七鳃鳗HBP1在抑制肿瘤增长方面具有重要研究价值,为肿瘤的治疗提供新的思路。
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