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鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由鸡传染性法囊病病毒（Infectious bursaldisease virus, IBDV）引起的一种急性、高度接触性传染病。IBD是危害世界养禽业最严重的疾病之一。除经典毒株外，具有致病性的血清I型毒株目前还包括弱毒株、抗原变异毒株和超强毒株（very virulent Infectious bursal disease virus, vvIBDV）。IBDV各型毒株致病性不尽相同，特别是1987年vvIBDV的出现给IBD的防控带来了新的挑战。vvIBDV的高致死率给养禽业造成了严重的损失。探索各型毒株致病性差异的分子基础及分子机制一直是IBDV研究的热点之一。IBDV基因功能及致病机制的早期研究主要聚焦在基因组A节段及其编码的VP2蛋白。近来的流行病学数据显示，基因组B节段及其编码的VP1蛋白与vvIBDV的爆发关系密切。本研究将进一步证实B节段及其编码的VP1蛋白与IBDV致病性增强的关系，定位其具体分子基础，并从病毒自身和宿主因子两个角度探讨其分子机制。克隆获得HuB-1、HeB10XS02、SD10LY013株IBDV流行毒株的全基因组序列。遗传进化分析表明，IBDV VP1蛋白分为明显的3个亚群，即第I亚群（非超强毒）、第II亚群（中国新型vvIBDV）、第III亚群（经典vvIBDV）。HuB-1及SD10LY01VP1属于第III亚群，HeB10XS02的VP1则属于第II亚群。VP1氨基酸序列比对结果表明，I、II、III亚群之间共存在17个保守氨基酸差异位点。根据IBDV毒株的全基因组序列分析和致病性研究，筛选到VP1来源于不同亚群的代表病毒，即Gt（其VP1属于第I亚群）、HLJ0504（其VP1属于第II亚群）、HuB-1（其VP1属于第III亚群）。分别将弱毒Gt、vvIBDV HuB-1的A节段与上述筛选的3个不同亚群代表病毒的B节段进行组合，共拯救6个重组病毒。研究结果表明，VP1蛋白影响IBDV的复制及致病性，第II、III亚群的VP1促进病毒在体内、外的复制，使IBDV的致病性增强，而第I亚群的VP1则降低病毒在体内、外的复制的能力，使IBDV的致病性减弱。根据VP1的三维结构，将VP1划分为3个功能结构域，即N-端结构域、中心活性区（M段）和C-端结构域。以HuB-1毒株VP1的N端、M段、C端替换Gt株的相应区域，拯救获得3个细胞适应重组病毒；同时，以Gt株VP1的N端替换HuB-1株的相应区域，拯救获得1个细胞非适应重组病毒。致病性研究结果表明，VP1N端由强变弱，病毒体外复制能力降低，体内复制能力提高，病毒致病性明显降低。VP1N端（1-167aa）氨基酸序列比对结果表明，VP1N端145-147位氨基酸形成3个独特的三联体基序。不同亚群的B节段具有不同的三联体基序，I亚群为NEG、II亚群为TEG、III亚群为TDN。在此基础上，以弱毒Gt为骨架，将NEG分别替换为TEG或TDN，拯救了2个点突变病毒（rGtTEG，rGtTDN）；相应的，以vvIBDV HuB-1为骨架，将TDN分别替换为NDN、TEG或NEG，拯救了3个点突变病毒（rHuBNDN，rHuBTEG，rHuBNEG）。研究结果表明，由NEG替换为TEG或TDN，病毒体外复制能力降低，体内的复制能力增强，致病性增强；反之，则使其体外复制能力增强，体内复制能力降低，病毒致病性降低。聚合酶活性检测结果表明，VP1N端145-147位氨基酸影响VP1聚合酶活性，由NEG替换为TEG或TDN，聚合酶活性明显降低；反之，其聚合酶活性明显提高。VP1聚合酶活性的改变进而引起病毒复制能力的改变，是145-147位氨基酸影响病毒致病性的分子机制之一。为了进一步探索影响VP1聚合酶活性的分子机制，本研究从病毒和宿主两个方面入手探寻影响其活性的因素。研究表明，IBDVVP3蛋白是VP1发挥聚合酶活性的必要因素，但VP3蛋白对病毒聚合酶活性的影响与VP1145-147位氨基酸影响聚合酶活性无正相关性。另一方面，通过酵母共转化实验、CO-IP、激光共聚焦实验证明宿主eIF4AII因子与VP1之间存在相互作用；该蛋白通过与VP1相互作用抑制其聚合酶的活性，进而限制IBDV的复制；进一步聚合酶活性检测表明，宿主eIF4AII因子能够抑制VP1野生型及突变型的聚合酶活性，但eIF4AII抑制聚合酶活性与VP1145-147位氨基酸影响聚合酶活性无正相关性。综上，本研究证实：VP1蛋白是影响IBDV致病力的重要因素；VP1N端145-147位氨基酸是影响IBDV致病性的重要分子基础，其分子机制是通过改变VP1的聚合酶活性进而影响到病毒复制；病毒蛋白（VP3）和宿主因子（eIF4AII）均参与调控VP1的聚合酶活性的发挥，eIF4AII通过与IBDVVP1之间的相互作用而抑制VP1聚合酶活性，进而限制IBDV的复制，是宿主抵抗病毒感染的天然防御因子之一。