腐败梭菌(clostridium septicum)是巴斯德在1877年培养的第一个厌氧致病微生物。它可引起多种动物疾病,如羊快疫、羊的恶性循环性水肿、鸡和火鸡的坏疽性皮炎,对牛、猪、鹿等动物的感染也有相关报道。腐败梭菌引起的疾病发病快、死亡率高,对畜禽养殖业有极大危害。 本文采用普通的培养基和厌氧培养方法分离并鉴定了专性厌氧菌腐败梭菌,暂定名为HeB01株。并以其基因组为模板扩增出α毒素基因片段连接到克隆载体pUCm-T Vector中,对目的片段α毒素基因进行了序列测定和同源性分析,序列分析结果表明:扩增的HeB01菌株的α毒素基因与Gene bank公布的4个参考毒株AB08346、AB08347、AB08348和AB08349的α毒素基因的核苷酸同源性为99.5%、99.7%、99.6%和99.6%,说明α毒素基因是十分保守的。然后将α毒素基因定向克隆于原核表达载体pQE30中,构建了重组质粒pQE30—α,转化受体菌M15,得到了重组菌株M15(pQE30—α),该菌株经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见其表达的48ku特异蛋白条带。ELISA和Westernblot检测说明表达的α毒素蛋白具有较好的反应原性。将表达的α毒素蛋白制成疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护能力。表明该重组菌株有望作为腐败梭菌基因工程类毒素疫苗的候选生产菌株。