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目的:
研究并发现经典名方百合地黄汤的抗抑郁质量标志物,为其后续制备工艺优选及质量标准制定提供理论基础。
方法:
1.基于课题组前期应用网络药理学对经典名方百合地黄汤实测成分中潜在抗抑郁活性成分的预测,结合文献分析初步确定潜在药效物质群,采用Caco-2细胞单层模型,并联合LC-MS技术鉴定百合地黄汤中的肠道吸收成分。
2.在已证实的肠道吸收成分的基础上,分别建立CORT、H2O2、NMDA诱导PC12细胞损伤模型,在损伤24h后分别给与10种不同的肠道吸收成分处理24h,CCK-8试剂盒检测PC12细胞存活率;ELISA试剂盒检测细胞内MAOA和BDNF的含量;WesternBlot检测细胞内IL-1β和TNF-α表达,分析并筛选出具有抗抑郁活性的药效物质。
3.在已筛选的抗抑郁药效物质的基础上,建立28天CUMS大鼠抑郁症模型,应激7天后同时应激与灌胃给药21天,观察抑郁症大鼠的体重增长率、糖水偏爱率、直立次数、理毛次数、旷场中运动总距离、高架十字迷宫中进入开放臂的运动时间与次数、悬尾不动时间,最终确认百合地黄汤抗抑郁质量标志物。
结果:
1.取Caco-2细胞单层的吸收池样本,经LC-MS检测共鉴定出梓醇、毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷、地黄苷A、益母草苷、β-谷甾醇、腺苷、京尼平苷、王百合苷B、麦角固醇等10种成分,表明这10种成分可被肠道吸收,具有良好的肠道吸收活性。
2.梓醇、毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷、地黄苷A、β-谷甾醇和王百合苷B均明显升高损伤后的PC12细胞存活率及细胞内BDNF表达,且能显著降低MAOA、IL-1β和TNF-α表达,对PC12细胞损伤具有明显改善作用,表明这6种具有一定的抗抑郁活性。
3.应激28天并持续给药21天后,百合地黄汤组、药效物质组方组与模型组相比可以不同程度的升高大鼠体重增长率、糖水偏爱率、理毛次数、运动总距离、进入开臂的运动时间与次数,降低大鼠悬尾不动时间(P<0.05),表明其均对大鼠抑郁样行为具有明显的改善作用,且二者之间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
本课题基于课题组前期应用网络药理学技术对百合地黄汤实测成分中潜在抗抑郁活性成分的预测,采用Caco-2细胞单层模型证实了10种肠道吸收成分,继而通过PC12细胞损伤模型,系统筛选出6种具有抗抑郁活性的药效物质,并证实了其抗抑郁活性与调节单胺类递质、HPA轴功能、炎症因子和脑源性神经营养因子表达相关,与之前文献报道的百合地黄汤抗抑郁机制相同,最终结合抑郁症动物模型确认梓醇、毛蕊花糖苷、王百合苷B可能为百合地黄汤抗抑郁质量标志物。
研究并发现经典名方百合地黄汤的抗抑郁质量标志物,为其后续制备工艺优选及质量标准制定提供理论基础。
方法:
1.基于课题组前期应用网络药理学对经典名方百合地黄汤实测成分中潜在抗抑郁活性成分的预测,结合文献分析初步确定潜在药效物质群,采用Caco-2细胞单层模型,并联合LC-MS技术鉴定百合地黄汤中的肠道吸收成分。
2.在已证实的肠道吸收成分的基础上,分别建立CORT、H2O2、NMDA诱导PC12细胞损伤模型,在损伤24h后分别给与10种不同的肠道吸收成分处理24h,CCK-8试剂盒检测PC12细胞存活率;ELISA试剂盒检测细胞内MAOA和BDNF的含量;WesternBlot检测细胞内IL-1β和TNF-α表达,分析并筛选出具有抗抑郁活性的药效物质。
3.在已筛选的抗抑郁药效物质的基础上,建立28天CUMS大鼠抑郁症模型,应激7天后同时应激与灌胃给药21天,观察抑郁症大鼠的体重增长率、糖水偏爱率、直立次数、理毛次数、旷场中运动总距离、高架十字迷宫中进入开放臂的运动时间与次数、悬尾不动时间,最终确认百合地黄汤抗抑郁质量标志物。
结果:
1.取Caco-2细胞单层的吸收池样本,经LC-MS检测共鉴定出梓醇、毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷、地黄苷A、益母草苷、β-谷甾醇、腺苷、京尼平苷、王百合苷B、麦角固醇等10种成分,表明这10种成分可被肠道吸收,具有良好的肠道吸收活性。
2.梓醇、毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷、地黄苷A、β-谷甾醇和王百合苷B均明显升高损伤后的PC12细胞存活率及细胞内BDNF表达,且能显著降低MAOA、IL-1β和TNF-α表达,对PC12细胞损伤具有明显改善作用,表明这6种具有一定的抗抑郁活性。
3.应激28天并持续给药21天后,百合地黄汤组、药效物质组方组与模型组相比可以不同程度的升高大鼠体重增长率、糖水偏爱率、理毛次数、运动总距离、进入开臂的运动时间与次数,降低大鼠悬尾不动时间(P<0.05),表明其均对大鼠抑郁样行为具有明显的改善作用,且二者之间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
本课题基于课题组前期应用网络药理学技术对百合地黄汤实测成分中潜在抗抑郁活性成分的预测,采用Caco-2细胞单层模型证实了10种肠道吸收成分,继而通过PC12细胞损伤模型,系统筛选出6种具有抗抑郁活性的药效物质,并证实了其抗抑郁活性与调节单胺类递质、HPA轴功能、炎症因子和脑源性神经营养因子表达相关,与之前文献报道的百合地黄汤抗抑郁机制相同,最终结合抑郁症动物模型确认梓醇、毛蕊花糖苷、王百合苷B可能为百合地黄汤抗抑郁质量标志物。