榆干离褶伞发酵液的溶栓作用及机制研究

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目的:研究榆干离褶伞发酵液的溶栓作用及其机制。方法:(1)细胞实验:采用MTT法测定L.u酵液对HUVEC存活率的影响;H2O2诱导HUVEC凋亡,MTT法检测L.u发酵液以及含药血清对HUVEC存活率的影响;通过DNA ladder检测L.u发酵液对HUVEC凋亡的影响;用流式细胞仪检测凋亡率;Western bolt检钡Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表达;比色法检测细胞培养液中LDH活性。(2)动物实验:在体外检测水解纤维蛋白的能力和血凝块溶解时间;观察给予L.u酵液后对小鼠体内出、凝血时间的影响,建立实验性高血脂症,测定L.u酵液对小鼠甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的影响以及肝匀浆的SOD、GSH、MDA等抗氧化指标;20%Fecl3诱导大鼠颈动脉血栓形成,检测L.u酵液的溶栓作用,并采用ELISA法测定血浆中t-PA、PAI-1、ET-1指标,硝酸还原酶法检测NO水平。结果:(1)细胞实验:MTT结果显示,在一定浓度范围内,L.u发酵液对HUVEC有保护作用;DNA ladder检测结果表明,模型组HUVEC可见凋亡条带,而高剂量用药组处理48h后的HUVEC凋亡条带不明显;流式细胞仪检测的结果显示,与模型组相比各用药组凋亡率显著降低;Western bolt结果显示,与模型组比较,用药组可以明显促进Bcl-2基因表达,同时能降低Bax, Caspase-9和Caspase-3基因表达;比色法检测细胞上清液的LDH活性的结果显示,与模型组相比,用药组呈剂量依赖性的降低了LDH活性。(2)在动物实验中,L.u发酵液可水解纤维蛋白,明显延长小鼠出凝血时间,血凝块体外溶解率升高,并且明显降低了实验性高血脂症小鼠的血脂水平,降低了MDA的含量,升高了GSH和SOD的活性。大鼠血栓模型实验结果表明,用药组显著降低血栓重量;与模型组比较,用药组ET-1与NO水平均升高,但两者比值降低;高剂量用药组PAI-1、t-PA水平均升高,但与模型组相比两者比值降低。结论:(1)L.u发酵液具有抗凝促纤溶作用。(2)L.u发酵液降血脂和抗氧化作用。(3)Lu发酵液具有调节血管活性物质功能。(4)L.u发酵液对血管内皮细胞有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。
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