多靶标脑梗塞标志物磁敏免疫快速分析方法研究

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脑梗塞又称缺血性脑卒中,已成为世界人口的第二大死因,仅次于缺血性心脏病。在我国,脑梗塞已成为国民第一位的死亡原因。在进行诊治时,能够快速并尽早地了解脑梗塞的严重程度,对脑梗塞的预后具有非常重要的意义。现阶段临床使用的神经影像学诊断技术检测成本高并需要专业的技术人员,确诊速度慢,因此开发出快速可靠,操作便捷的脑梗塞检测技术意义重大。  本研究以免疫学诊断技术为基础结合微流体传感器,建立了脑梗塞标志物D-二聚体(D-dimer)、超敏CRP(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、神经特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)的联合快速检测方法,并证明了方法的实用性。主要研究内容如下:  1、从抗体固定方法、标记抗体修饰方式以及免疫反应缓冲体系的选择三个方面讨论了在芯片上建立免疫生化反应的基本条件。  2、利用静态实验对D-dimer、hs-CRP以及NSE三种脑梗塞标志物的抗体进行了筛选,筛选内容包括抗体组合的配对性以及灵敏度、抗体组合的稳定性、抗干扰能力以及利用抗体组合检测临床血液样本,考察它们检测的准确度。最终筛选出针对三种标志物检测的最优抗体组合。  3、利用筛选出的抗体组合以及芯片上的生化免疫反应条件,将芯片上的静态实验移植到结合微流体的GMR磁敏传感器中,分别建立针对不同生化标志物的检测方法。其中,D-dimer的检测范围可以到达5~15000 ng/mL; hs-CRP的检测范围可以达到50~30000 ng/mL; NSE的检测范围可以达到1~260 ng/mL。该性能可满足临床使用的要求,且检测方法快速,操作简单。同时,利用临床血液样本的检测,证明了该方法的实用性。  4、在分别建立了三种标志物的检测方法之后,利用微流体GMR传感器建立了三种标志物联合检测的方法,三种标志物在联合检测时没有相互干扰。利用此方法检测了临床患者血液样本80例,与现有的商品化检测手段相比,三种标志物的相关系数均在0.90以上,可以满足于临床使用的要求。三种标志物的浓度大体呈现出协同增长的趋势,间接说明三者对于脑梗塞的诊断具有良好的指示作用。  由于实现了多靶标的联合检测,且检测时间只需9分钟,在大大节约了检测时间的同时提高了检测结果的临床指导意义。与传统方法相比,该方法拥有更高的灵敏度,更快的检测速度,更简单的操作,具有广阔的应用前景。
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